uhrf1 基因在人卵巢癌细胞株ovcar-3 中的表达及意义.doc

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1、UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR・3中的表达及意义周碧芳邓斐周学惠吴强江苏省肿瘤医院妇瘤科210009【摘要】目的探讨UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR・3屮的表达及其生物学意义。方法利用小干扰RNA基因沉默技术，将体外化学合成的针对UHRF1基因的siRNA转染至人卵巢癌细胞株OVCAR・3细胞;实吋荧光定量PCR和Westernblot分别检测转染前后细胞UHRF1mRNA和蛋白表达水平的变化；CCK-8实验和流式细胞术分别检测沉默UHRF1基因后对细胞增殖和凋亡的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示，siRNA转染后UHRF1基因在卵巢癌细胞株OVCAR・3

2、屮表达显著降低（PvO.01）；Westernblot结果显示，siRNA转染后，转染组、阴性对照组和空白组细胞UHRF1蛋白表达量与P-actin蛋白表达量相对比分别为0.16土0.04、0.33士0.03、0.35士0.070转染组细胞UHRF1蛋白表达水平低于阴性对照组和空白组，差异具有统计学意义（P<0.05）,而阴性对照组和空白组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；CCK・8实验和流式细胞术结果表明，UHRF1基因沉默后对细胞增殖产生了抑制作用，表现为在转染的第二天、第三天和第四天，转染组细胞增殖率都要低于空白组，差异具有显著的统计学意义（P<0・01）。同吋，抑

3、制UHRF1基因的表达可以促进细胞的凋亡，转染组、阴性对照组和空白组细胞的凋亡率分别为（64.97±2.22）%、（28.57±2.93）%、（27.75±1.07）%,差异具有显著性意义（P<0.01）。结论利用小干扰RNA基因沉默技术，UHRF1基因沉默后可以显著抑制卵巢癌OVCAR-3细胞UHRF1的表达，这为研究UHRF1基因作为卵巢癌新的诊断和治疗的靶标提供了基础和依据。【关键词】UHRF1基因；卵巢癌；OVCAR・3细胞株；RNA干扰ExpressionofUHRF1inovariancancercelllineOVCAR-3anditssignificanceZh

4、ouBifang,DengFei,ZhouXuehui,WuQiangDepartmentofGynecologicalOncology,CancerHospitalofJiangsuProvince,Nanjing210009,China.[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofUHRF1geneinhumanovariancancercelllineOVCAR-3anditsbiologicalsignificance.MethodsUsingthesiRNAgenesilencingtechnique,chemical

5、synthesissmallinterferingRNAforUHRF1genesequenceweretransfectedintothehumanovariancancercelllineOVCAR-3；Real-timequantitativePCRandWesternblotassayseparatelywasusedtocomparethemRNAandproteinlevelofUHRF1beforeandaftersiRNAtransfection;CCK-8assayandflowcytometrywereusedtoinvestigatethecellprol

6、iferationandcellapoptosisafterUHRF1genesilencing・ResultsAstheReal-timequantitativePCRresultsshown,theexpressionofUHRF1wassignificantlydecreasedinthecellsofOVCAR-3afterthetransfectionofsiRNA(P<0.01)；AstheWesternblotresultsshown,therelativeexpressionbetweentheUHRF1proteinandthe卩-actinproteinin

7、transfectiongroup,negativecontrolgroupandblankgrouprespectivelywas0・16±0.04,0.33土0.03and0.35士0.07.TheUHRF1proteinlevelintransfectiongroupwaslowerthannegativecontrolgroupandblankgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0・05)・However,compared