毕业论文（设计）-金黄色葡萄球菌及其肠毒素快速检测技术的研究

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1、簦雾盏螂。簟谬摘要本文以快速、简便、准确地检出食品中金黄色葡萄球菌及其肠毒素为目的，进行了金黄色葡萄球菌和葡萄球菌肠毒素检测方法的研究。采用3M纸片法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果与国标法基本一致，而前者具有更高的灵敏度。3M纸片法的检测周期为2天，国标法为6天。证明3M纸片法更简便实用。采用反向乳胶凝集法(RPLA)、miai-％qdas法(ELFA)和蛋白芯片法检测食品中的葡萄球菌肠毒素，结果显示：RPLA法的检出率较高(61．9％)，但所需检测时间较长；ELFA法快速、简便，但检出率较低(50．o％)，且不能分型检测葡萄球菌肠毒素。相比之下，

2、蛋白芯片法具有高检出率(71．4％)、高通量、多元化、快速准确的特点，明显优于RPLA和ELFA。论文又对蛋白芯片法的检测条件进行了优化，结果显示适宜的检测条件为：兔抗SEAIgG固定液浓度为1．0mg／mL，兔抗SEBIgG和兔抗SECIgG固定液浓度均为O．5mg／mL；抗体固定时问为O．5h；封闭时间为0．5h；抗体缓冲液为pH7．2的磷酸盐缓冲液；封闭液中加入5％的蔗糖；抗原抗体反应时间为1h。采用优化后蛋白芯片法测定不同种类的葡萄球菌肠毒素—sEA、SEB和SEC，结果SEA和SEB的检测限为0．0179／mL，SEC的检测限为0．179

3、／mL。SEA的检出率为91．5％，SEB为92．9％，SEC为94．O％。证明了蛋白芯片法的快速、方便和高效性。关键词：葡萄球菌；金黄色葡萄球菌；葡萄球菌肠毒素；3M纸片法；GB法；反向乳胶凝集试验；mini—Vidas法；蛋白芯片沈阳农业大学博士学位论文第一章文献综述一、生物毒素的研究现状生物毒素是一大类生物活性物质的总称，主要包括真菌毒素、海洋毒素、细菌毒素等{陈冀胜，2003)。生物毒素对食品安全和人类健康构成了严重的威胁，因此，对进出口食品进行生物毒素的检测分析是非常必要和迫切的。(一)真菌毒素真菌毒素(Mycotoxins)是某些丝状真

4、菌产生的具有生物毒性的次级代谢产物，这些毒性真菌包括曲霉、青霉、镰刀霉、链格孢霉、棒孢霉和毛壳菌等。最先被分离纯化的真菌毒素为麦角生物碱(Hoerr．F．J．，1983)和青霉酸，其他真菌毒素也相继于二十世纪三十年代和四十年代得以分离纯化，然而，对真菌毒素的真正研究却是从1962年黄曲霉毒素的发现开始的。许多重要的真菌毒素都有同时影响几个器官的致癌性，它们还可使这些影响进一步发展，导致生育缺陷及影响免疫系统，有的还具有激素作用或神经毒性，除对这些不同的器官—位点特殊作用外，还观察到有干扰肠胃系统、刺激皮肤及血液病学(李群伟，王绍平，2001)的影响

5、。真菌毒素具有两种毒性，一是致DNA损伤，严重者可致癌，二是细胞毒性，有破坏质膜和细胞酶的作用，但不同毒素各有不同。文献报告(杨建伯，2002)，一些疾病可能与真菌毒素有关，如肝癌、地方性肾病、食物中毒白细胞缺乏病(ATA)、食道癌、克山病、大骨节病、趴病等。1、黄曲霉毒素(Aflatoxin)苎堕燮黄曲霉毒素是真菌毒素，实际上是指一组化学组成相似的毒素，黄曲霉和寄生曲霉是产生黄曲霉毒素的主要菌种，其他曲霉、毛霉、青霉、镰孢霉、根霉等也可产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素最常见于花生及花生制品，玉米、棉籽、一些坚果类食品和饲料中，主要有黄曲霉毒素B1、B2

6、、G1及G2等10多种(ReddyR．V．，1983)，其中以黄曲霉毒素B1存在量最大，也最具毒性；黄曲霉毒索M1为黄曲霉毒素B1的代谢物，毒性仅次于黄曲霉毒素B1，常存在于牛奶和奶制品中。黄曲霉毒素是已被证实的致癌物，其中黄曲霉毒素B1、M1是强致癌物。黄曲霉毒素作用机理是影响细胞膜，抑制RNA合成并干扰某些酶的感应方式，中毒症状无特异表现，按症状的严重程度不同，临床可表现为发育迟缓、腹泻、肝肿大、肝出血、肝硬化、肝坏死、脂肪渗透、胆道增生等。黄曲霉毒素是细胞毒素，也是致癌物质，饲料中含量达到5mg／kg，即可引起大鼠RNA、DNA合成障碍。2、

7、桔霉素(Citrinin)桔霉素是1931年从桔青霉中首次获得的，是某些青霉和曲霉的代谢物，科学家在澳洲的一种草本植物Crota]ariacrispata里也发现了桔霉素(Sharma，R．P．，1991)。桔霉素主要危害肾，然而毒性相对较小。其毒性来自Openlactonemoeity的作用，其结构类似线粒体酶的活性部位且竞争与底物的结合。实验证明，桔霉素可抑制大鼠肝细胞ATP酶，琥珀酸脱氢酶和细胞色素C氧化酶的活性。3、环匹克尼酸(Cyclopiazonicacid，CPA)婆里型!查塑!堂堡墼环匹克尼酸(CPA)是由曲霉菌及青霉菌的几个菌种产

8、生的。据报道．CPA比黄曲霉毒素更频繁地出现在被曲霉菌污染的花生上。有人从食品和饲料中分离出大量青霉菌，从中鉴定出数十种真