金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究【开题报告】

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1、毕业论文开题报告食品质量与安全金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究一、选题的背景与意义金黄色葡萄球菌（staphylococcusaureus）(以下简称金葡)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在［8］，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当

2、金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100g的肠毒素A即可出现食物中毒的症状。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100℃加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠

3、毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100℃两小时才能破坏其毒性。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的爆发。金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染，一般地，在PH6.0-8.0、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食

4、品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险。如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有

5、肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导作用。金葡菌是一种重要的致病菌，当它污染食品后，在适宜的条件下会产生金黄色葡萄球菌肠毒素。因此，本实验拟调查研究冻虾仁中金黄色葡萄球的数量，按照国家标准方法GB/T4789.10检测并计数。同时采用Mini-VIDAS的葡萄球菌肠毒素（SET）试剂盒提供的方法提取产品肠毒素，根据酶联荧光免疫分析原理检测是否污染肠毒素，研究金葡菌和肠毒素间存在的关系。在虾仁中感染接种入金葡菌，初步研究虾仁中金葡菌的产毒情况，包括培养时间和培养温度等条件的影响，为现实条件中的产品存放

6、和安全食用供指导。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：1、金黄色葡萄球菌致病性研究金黄色葡萄球菌污染食物后，不仅使其腐败变质，而且部分细菌产生肠毒素，引起食物中毒。金葡菌具有多种蛋白质抗原，常用于食品检测的有葡萄球菌肠毒素和葡萄球菌A蛋白（staphylococcalproteinA,SPS）,葡萄球菌肠毒素是一组结构相关，毒力相近的胞外蛋白质，迄今为止从血清上已被鉴定的SE有10种：A，B，C，D，E，G，H，I，J，K型，其中C型抗原又根据等电点的不同分为3个严型（C1，C2，C3），其中肠毒素A是分子量为27KD

7、的单体蛋白，它是葡萄球菌食物中毒最常见的类型，D，B，C次之［4］。肠毒素可与相应的抗毒素特异性结合。因此，采用其中之一有可检测标记的，特异性的单克隆或多克隆抗体，与样品中肠毒素结合，结果可采用比色、放免、荧光检测，或采用凝集、沉淀等肉眼可观察的免疫学现象来判断肠毒素的有无。A蛋白存在于葡萄球菌的表面，具有种属特异性，无型别特异性，能与人与多种哺乳动物的免疫球蛋白IgG和Fc片段结合。因此可采用IgG包埋的乳胶颗粒，结合血浆纤维蛋白原与凝集因子的凝集反应，来检测金葡菌的有无。按照国家标准GB/T4789.10-2008的

8、附录B中，对金葡菌肠毒素的检测，采用酶联免疫分析法（ELISA）方法，预先将肠毒素的抗体（单价或多价抗体）与载体吸附。当加入待检样品后，如样品中含有肠毒素，即可与之特异性结合。再采用第二抗体（抗抗体）与抗原抗体复合物结合，形成抗原——抗体——抗抗体三层“夹心”结构，而抗抗体上标记有某种酶（如碱性磷酸酶、过氧化物酶等）