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《多重pcr检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究刘继超，姜铁民，姜阿赤，陈历俊通讯作者：陈历俊，chlj@263.net基金项目：“十一五”国家科技支撑计划(2009BADB9B06)；北京市重点科技计划项目(D1011050460000)作者简介：刘继超，男，1983年出生，硕士，乳品微生物。（北京三元食品股份有限公司，北京100076）摘要：目的：为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法：根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列，选择合成了6对特异性
2、引物，建立多重PCR体系，并对反应条件进行了优化。结果：6对引物能同时特异地扩增出120bp、478bp、257bp、319bp、170bp和375bp的目的片段，表明6对引物具有良好的特异性。结论：本研究成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法，在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。关键词：多重PCR；检测；金黄色葡萄球菌；肠毒素AstudyonfastdetectionofsixkindsofStaphylococcusaureusenterotoxinsgeneswithamultiplex
3、PCRmethodLIUJi-chao,JIANGTie-min,JIANGA-chi,CHENLi-jun*(BeijingSanyuanFoodsCo.Ltd.,Beijing,100076)Abstract:Objective:ToestablishamultiplexPCRmethodfordetectingSEA,SEB,SEC,SED,SEEandSEHgenesofStaphylococcusaureusfastandhighlyeffectively.Methods:AccordingtoSEA,SEB,SEC,SED,SE
4、EandSEHgenesequencesofStaphylococcusaureusinGenBankandrelevantliteratures,sixpairsofspecificprimershadbeendesigned.EstablishedmultiplexPCRmethodsanditsreactionconditionswereoptimized.Results:Undertheoptimizedconditions,thesixfragmentsof120bp,478bp,257bp,319bp,170bpand375bp
5、weresimultaneouslyamplifiedfromsixcoupleprimers.TheresultsshowedthatthePCRofsixpairsprimersweregoodspecifity.Conclusions:Asimple,rapidandsensitivemultiplexPCRmethodfordetectingsixkindsofS.aureusenterotoxingeneshasbeenestablished.ItcoulddetectSEA,SEB,SEC,SED,SEEandSEHgeness
6、imultaneously,therefore,theprospectoffastdetectionofStaphylococcusaureusenterotoxinisbrilliant.Keywords:multiplexPCR,detection,Staphylococcusaureus,enterotoxin 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SA)，是国内外最常见的细菌性食物中毒病原体之一，该菌引起食物中毒的主要原因是产生葡萄球菌肠毒素(staphylococcalenterotoxins，SEs)。根据
7、其血清学特性，SEs可分为5型(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)，近几年还报道了SEG、SEH、SEI、SKJ、SEK、SEL、SEM、SEN和SEO、SEP、SEQ、SER、SET、SEU等新分型的肠毒素[1-4]。目前国内外用于检测SEs的方法按照检测原理的不同，可分为生物学检测方法、免疫血清学方法、聚合酶链反应技术、生物传感器技术及超抗原技术等[5-6]6。这些方法都存在一个问题：即一次实验只能检测一种病原菌。如采用多重PCR检测，则既具有PCR简便快速的特点，又能在同一反应体系中同时检测多种SEs。本研究针对金黄色葡萄球菌肠
8、毒素的6种血清型(A、B、C、D、E、H型)设计选择特异性PCR引物，进行多重PCR检测，建立一种快速一次性检测6种肠毒素血清型的多重PCR检测方法。1材料与方法1.1材料1.1
