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时间:2019-05-22
《敲减Anp32a通过下调JNKP38MAPKs活性抑制多柔比星诱导的心肌细胞凋亡》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直量太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写):岛窟嗣签字日期:7刀;年6月占日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数
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3、敲减Anp32a经MAPKs通路抑制多柔比星诱导的凋亡。方法:原代心肌细胞培养并运用肌钙蛋白I(cTnI)对其进行鉴定。实验分组:正常心肌细胞组(CMs组)、多柔比星(DOX)组、空载病毒(NC—LV)组、空载病毒+多柔比星(NC—LV+DOX)组、目的基因病毒(Anp)组、目的基因+多柔比星(Anp+DOX)组。将构建的lentivirus-scrRNAi和lentivirus—Anp32a/GVl15一RNAi载体分别转染入NC—LV组、NC-LV+DOX组和Anp组、Anp+DOX组。转染72h后应用免疫荧光法检测其转染心肌细胞的效率,并于DOX组、NC-LV+DOX组和Anp+DOX
4、组加入多柔比星(1umol/L)作用12h建立心肌细胞凋亡模型,应用AnnexinV—FITC法检测6组心肌细胞凋亡率,以心肌细胞凋亡率作为心肌细胞凋亡的观察指标,观察敲减Anp32a对多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响。运用Westernblot法检测CMs组、DOX组、Anp组和Anp+DOX组的ERKl/2、p-ERKl/2、JNK、p-JNK、P38MAPKs、p-P38MAPKs蛋白表达水平。数据运用SPSSl3.O统计软件包进行多组间单因素方差分析和组间t检验。结果:体外原代培养的心肌细胞,呈多边形、梭形等,部分细胞聚集成细胞簇,呈放射状排列的同心圆状,搏动呈同步性,搏动频率多为6
5、0-100次/分。对细胞进行cTnI鉴定显示85%以上细胞呈阳性表达,符合心肌细胞特征。转染NC-LV和Anp32a敲减重组慢病毒心肌细胞72h后,荧光显微镜观察分别发现90%和80%以上的心肌细胞表达绿色荧光蛋白。分析AnnexinV—FITC法测定DOX组和CMs组心肌细胞凋亡率[(31.94±1.24)%VS(3.62±0.53)%,(p0.05)]、[(33.14±1.57)%VS(31.94
6、±1.24)%,(p>O.05)],提示慢病毒对心肌细胞的毒性不影响结果分析;分析Anp+DOX组与DOX组凋亡率[(16.62±2.07)%VS(31.94±1.24)%,(p<0.05)],说明敲减Anp32a能部分抑制多柔比星诱导的心肌细胞凋亡。分析DOX组与CMs组p-ERKl/2/ERKl/2比值未见明显差异,摘要无统计学意义(p>O.05),说明多柔比星未引起ERKl/2活性的变化;DOX组与CMs组p-JNK/JNK比值高了1.5倍,差异有统计学意义(p(O.05),说明多柔比星通过增加JNK的活性诱导心肌细胞凋亡;DOX组与CMs组p—P38/P38MAPKs比值高了0.9倍
7、,差异有统计学意义(p
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