多柔比星诱导白血病细胞耐药产生的机制研究

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1、多柔比星诱导白血病细胞耐药产生的机制研究【摘要】目的：观察多柔比星诱导人白血病细胞系K562产生耐药的规律，初步探讨耐药产生的机制。方法：在设定的浓度梯度和作用时间下，用多柔比星处理K562细胞，采用RTPCR法测定mdr1基因及其他耐药相关基因的表达；运用流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白（Pgp）的表达水平，用免疫荧光染色检测细胞凋亡相关蛋白Survivin的表达。结果：多柔比星在体外能诱导K562细胞产生耐药性，随着多柔比星作用浓度的增加和时间的延长，K562中mdr1及Pgp

2、的表达逐渐上调，MRP,TopoⅡ,YB1和NFkappaB基因的表达亦有改变，GST则无明显变化，凋亡相关基因Survivin及其编码的蛋白在耐药产生过程中表达亦上调。结论：多柔比星以剂量和时间依赖性方式诱导K562细胞产生耐药，多种耐药相关基因参与诱导耐药的形成，凋亡相关基因的表达改变亦是其耐药形成机制之一。【关键词】多柔比星　K562细胞　多药耐药　mdr－1基因　P糖蛋白Studyonmechanismsofdoxorubicininducedmultidrugresistance　in

3、leukemiacelllineK562QINRujuan，XUWenlin，ZHOULeilei，TANGHuarong，SHENHuiling，WANGFachun(DepartmentofCentralLaboratory，theAffiliatedPeople′sHospitalofJiangsuUniversity，ZhenjiangJiangsu212002，China)［Abstract］Objective:Toinvestigatedoxorubicinind

4、ucedmultidrugresistance(MDR)inhumanleukemiacelllineK562andthenthemechanismsofdrugresistancewerestudied.Methods：K562cellsweretreatedwithdoxorubicinatdifferentconcentrationsandtimes.Theexpressionofmdr1andotherrelatedgeneswereexaminedbyreversetranscriptio

5、npolymerasechainreaction(RTPCR).Pglycoprotein(Pgp)wasdetectedbyflowcytometry(FCM)andtheproteinSurvivinwasanalysedbyimmunofluorescence.Results：IncubationofK562cellswithdoxorubicinnotonlyinducedfunctionallymdr1overexpression,butalsoincreasedtheexpres

6、sionofothergenesincludingMRP,TopoⅡ,YB1,NFkappaBandSurvivin.Increasinglevelofmdr1mRNAcorrelatedwithitscorrespondingPglycoproteinlevelindruginducedcells.Survivin,amemberofIAPfamilyproteins,wasalsohighexpressedafterincubationofK562cellswithdoxorubicin

7、.Conclusion：DoxorubicincaninducefunctionalmultidrugresistanceoverexpressioninK562cellsindoseandtimedependentmanner,andthefunctionalmultidrugresistancemaybeduetotheabnormalexpressionofgenesMRP,TopoⅡ,YB1,NFkappaBandtheantiapoptosisgeneSurvivin.［Keyword

8、s］Doxorubicin;K562;MDR;mdr1gene;Pglycoprotein白血病细胞多药耐药（multidrugresistance，MDR）的出现是化疗失败的主要原因之一。长期以来，基础与临床工作者致力于研究白血病细胞MDR产生的机制及其逆转方法，其中mdr1基因编码的P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp)高表达是研究最深入的机理之一。Pgp是一个ATP依赖性药物外排泵，能利用ATP水解释放的能量主动将亲脂性药物泵