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1、CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药：吴达龙睢凤英张成文吕焕章【摘要】目的:探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine,VCR)人胃癌多药耐药(multidrugresistance,MDR)细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法：将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin,DOX)和/或CQ11在体外共同培养，采用MTT法检测其细胞毒作用；采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果：SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度
2、是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5和5.0mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01)和14倍(P<0.01)。DOX蓄积实验表明，CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论：通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性【关键词】多药耐药;氯喹;胃癌;逆转剂肿瘤多药耐药(multidrugr
3、esistance,MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。MDR是一种独特的广谱耐药现象，是导致化疗失败的重要原因，许多天然的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine,VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin,DOX)、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeabilityglycoprotein,Pgp)过表达。作为一个ATP依赖
4、性的药物转运泵，Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外,从而减少细胞内药物蓄积,增加药物外排［3］。MDR逆转剂，如维拉帕米和环孢菌素A，能与Pgp结合，抑制Pgp的药物外排功能，增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积，从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。然而，大量的临床研究结果表明，上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大，体内难以达到有效逆转浓度［3］。因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂，已成为肿瘤MDR研究的热点。氯喹CQ11图1氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础,经侧链改造而获得的新化合物(
5、化学结构见图1)，由本课题组合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型，研究CQ11对SGC7901/VCR细胞的体外MDR逆转效应。1材料与方法1.1药物和试剂CQ11由本课题组自行合成,以二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)溶解。MTT和DOX购自Sigma公司。1.2细胞培养SGC7901细胞和SGC7901/VCR细胞（将SGC7901细胞在含浓度不断递增的VCR的培养基中连续培养所获得的耐药细胞株）均由本室保存［4］，细胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640
6、培养基，在37℃、5%CO2孵箱中培养。SGC7901/VCR在含0.80mol/LVCR培养液中稳定生长,在正式实验前2周撤去VCR。1.3细胞存活率测定采用MTT法测定细胞毒作用［4］。取生长旺盛SGC7901和SGC7901/VCR细胞，稀释后接种于96孔平底培养板中（每孔含4.0×103细胞），置CO2培养箱中培养。接种24h后分别加入不同浓度的DOX和/或CQ11，使液体总量达到每孔200μL;继续培养72h，弃去培养液，每孔加MTT10μL(5.0g/LinPBS),培养4h,弃去MTT，每孔加DMSO15
7、0μL,在微孔板震荡器上振荡10min,成色产物溶解后用酶标仪测570nm处吸光度值。以不加药的瘤细胞组为对照，求给药组IC50，并计算耐药逆转倍数(reversalfold,RF)。1.4细胞内DOX蓄积实验DOX蓄积实验参照我们以往的报道进行［2］。简述如下：取生长旺盛的SGC7901或SGC7901/VCR细胞,调节其浓度至1.0×106/mL,加入DOX4.0μmol/L和不同浓度的CQ11(分别为0.00,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0和10μmol/L),在37℃、5%CO2孵箱中培养60min
8、,取上述溶液1.0mL,100×g离心5min,冷PBS洗2次,加入6.0mL50%乙醇-0.3mol/L盐酸溶液,抽提2h,100×g离心10min,收集上清,在荧光分光光度计上测DOX的荧光强度(激发波长和发射波长分别为488nm和590nm)。在盐酸-乙醇溶液中加入一系列已知浓度的DOX作为标准溶液,分别测定其荧光强度,建立
