E2F-1基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC7901／顺铂多药耐药性的逆转-论文.pdf

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1、2014年3月第36眷第3期ChinJOnco1．March2014．Vo1．36．No．3·17l·．基础研究．E2F一1基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC79O1／Jf顷铂多药耐药性的逆转廉超杨杰王晓通谢玉波肖强【摘要】目的探讨E2F．1基因沉默后对人胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC7901／DDP多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法将人胃癌耐药细胞株SGC7901／DDP接种于6孔板，并分为以E2F．1基因沉默重组慢病毒颗粒Lv．shRNA—E2F一1感染的SGC7901／DDP细胞(实验组)、以对照慢病毒颗

2、粒Lv．shRNA，NC感染的SGC7901／DDP细胞(阴性对照组)以及常规培养的SGC7901／DDP细胞(空白对照组)。采用Westernblot技术检测各组细胞中E2F一1蛋白的表达，采用四甲基偶氮唑蓝法检测阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对各组细胞的半数抑制浓度(IC。)，采用流式细胞术检测各组细胞中阿霉素的泵出率和细胞凋亡率，采用半定量RT—PCR和Westernblot技术检测各组细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)及凋亡相关基因cyclinD1、e-Myc、Skp2mRNA和蛋白的表达

3、水平。结果实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901／DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量分别为0．794±0．033、1．487±0．082和1．511±0．084，实验组SGC7901／DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量较阴性对照组和空白对照组分别下降46．6％和47．5％(P<0．01)。阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对实验组SGC7901／DDP细胞的Ic。均较阴性对照组和空白对照组明显降低(均P<0．01)。实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901／DDP细胞中阿霉素的泵出率分别为(0．16±0．01

4、)％、(0．374-0．O1)％和(0．35±0．02)％，实验组SGC7901／DDP细胞中阿霉素的泵出率明显低于阴性对照组和窄白对照组(P<0．01)。实验组、阴性对照组和空白对照组SC~7901／DDP细胞的凋亡率分别为(33．824-1．26)％、(17．344-0．81)％和(13．164-1．06)％，实验组SGC7901／DDP细胞的凋亡率明显高于阴性埘照组和空白对照组(P<0．01)。与阴性对照组和空白对照组比较，实验组SGC7901／DDP细胞中MDR1、MRP、cyclinD1Myc和skp2mR

5、NA及蛋白的表达水平均明显降低(均P<0．01)。结论沉默E2F一1基因的表达可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性，并可直接或间接下调经典多药耐药相关基因MDR1和MRP的表达，从而逆转胃癌细胞的多药耐药性，其机制可能与cyclinD1、c—Myc和Skp2的表达下调有关。【主题词】E2F一1基因；胃肿瘤；抗药性，肿瘤；顺铂ReversionofmultidrugresistanceofhumangastriccancerSGC7901／DDPcellsbyE2F-1genesilenc

6、ingLianChao，YangJie，WangXiaotong，XieYubo，XiaoQiang．DepartmentofGastrointestinalandGlandSurgery，theFirstAfiliatedHospitalofGnangxiMedicalUniversity，Nanning530021，ChinaCorrespondingauthor：XiaoQiang，Email：xiaoqiang20050@aliyun．con【Abstract】ObjectiveToinvestigateth

7、eeffectsofE2F一1genesilencingonmultidrugresistanceofhumangastriccancerSGC7901／DDPcellsanditspossiblemechanisms．MethodsGastriccancerSGC7901／DDPcellswereseededin6wellplatesanddividedintothreegroups：theexperimentalgroup．blankcontrolandthenegativecontrolgroups．Forth

8、eexperimentalgroup，theSGC7901／DDPceilsweretransfectedwithrecombinantlentivirusvector(Lv．shRNA—E2F．1)，whilethenegativecontrolwiti~an(',ontrolIentiviralvector(Lv．shRNA．NC)andt