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1、CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药论文吴达龙睢凤英张成文吕焕章【摘要】目的:探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine,VCR)人胃癌多药耐药(multidrugresistance,MDR)细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法：将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin,DOX)和/或CQ11在体外共同培养，采用MTT法检测其细胞毒作用；采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果：SGC7901/VCR细
2、胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5和5.0mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P0.01)、5.5倍(P0.01)和14倍(P0.01)。DOX蓄积实验表明，CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论：通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性【关键词】多药耐药;氯喹;胃癌;逆转剂肿瘤多药耐药(mul
3、tidrugresistance,MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。MDR是一种独特的广谱耐药现象，是导致化疗失败的重要原因，许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine,VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin,DOX)、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeabilityglycoprotein
4、,Pgp)过表达。作为一个ATP依赖性的药物转运泵.freelethylsulfoxide,DMSO)溶解。MTT和DOX购自Sigma公司。1.2细胞培养SGC7901细胞和SGC7901/VCR细胞（将SGC7901细胞在含浓度不断递增的VCR的培养基中连续培养所获得的耐药细胞株）均由本室保存［4］，细胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2孵箱中培养。SGC7901/VCR在含0.80mol/LVCR培养液中稳定生长,.freelin,成色产物溶解后用酶标仪测570n
5、m处吸光度值。以不加药的瘤细胞组为对照，求给药组IC50，并计算耐药逆转倍数(reversalfold,RF)。1.4细胞内DOX蓄积实验DOX蓄积实验参照我们以往的报道进行［2］。简述如下：取生长旺盛的SGC7901或SGC7901/VCR细胞,调节其浓度至1.0×106/mL,加入DOX4.0μmol/L和不同浓度的CQ11(分别为0.00,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0和10μmol/L),在37℃、5%CO2孵箱中培养60min,取上述溶液1.0mL,100×g离心5min,冷PB
6、S洗2次,加入6.0mL50%乙醇-0.3mol/L盐酸溶液,抽提2h,100×g离心10min,收集上清,在荧光分光光度计上测DOX的荧光强度(激发波长和发射波长分别为488nm和590nm)。在盐酸-乙醇溶液中加入一系列已知浓度的DOX作为标准溶液,分别测定其荧光强度,建立DOX浓度-荧光强度标准曲线。1.5统计学处理实验数据以均数±标准差表示，显著性检验采用Student'st检验，P0.05被认为差异有统计学意义。2结果2.1CQ11的细胞毒作用CQ11对SGC7901和SGC7901/VCR
7、细胞的IC50分别是32±3.3μmol/L和34±4.3μmol/L,10μmol/LCQ11对SGC7901和SGC7901/VCR细胞无细胞毒作用。2.2CQ11对SGC7901/VCR细胞的耐药逆转效应如表1所示，SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。对SGC7901/VCR细胞,CQ11具有显著的耐药逆转作用;1.0μmol/LCQ11即具有明显的耐药逆转效应,5.0μmol/LCQ11使DOX对SGC7901/VCR细胞IC50从2.1±0.17μm
8、ol/L降低到0.15±0.012mol/L(耐药逆转倍数为14倍)，显示CQ11对SGC7901/VCR细胞的MDR具有显著的逆转作用;5.0μmol/LCQ11使DOX对SGC7901细胞IC50从0.056±0.0047μmol/L降低到0.016±0.0024mol/L(增敏倍数为3.5倍),表明在SGC7901细胞CQ11有轻度的DOX增敏作用。表1CQ11增强DOX对SGC7901/VCR和SGC7901注：与未加CQ11的SGC7901细胞
