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1、中西药结合对胃癌多药耐药的逆转和诱导凋亡作用【摘要】目的：探讨中西药结合对人胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR的逆转和诱导凋亡作用.方法：以斑贞1号和/或氟尿嘧啶（5FU）为阳性对照组,采用MTT法观察斑贞1号与5FU,川芎嗪（TMP）联合对SGC7901/ADR细胞的逆转及杀伤作用.采用流式细胞仪（FCM）测定各药物组细胞周期的变化.光镜和电镜观察药物联合前后SGC7901/ADR细胞形态结构变化.结果：TMP明显提高SGC7901/ADR细胞对斑贞1号+5FU的敏感性,逆转倍数为10.39倍.细胞毒作用为:斑贞1号+5FU+TMP
2、>斑贞1号+5FU>斑贞1号>5FU（P<0.01）.FCM分析证明3种药物联合与对照组相比可将细胞阻滞在DNA合成前期和静息期G0/G1期（P<0.05）.光镜和电镜下观察到癌细胞体积变小,胞体全面变圆皱缩及典型的凋亡形态学改变.结论：中西药结合对SGC7901/ADR细胞有较强的逆转和诱导凋亡作用,为当前肿瘤治疗提供了新思路.【关键词】中西医结合疗法胃肿瘤肿瘤细胞多药耐药性逆转调亡 0引言 化疗在胃癌综合治疗中发挥着重要作用,但疗效差,主要是细胞对化疗药物产生了多药耐药性（multidrugresistanc
3、e,MDR）［1-2］.解决MDR主要方法,一是寻找对MDR细胞有效的抗肿瘤药物,二是通过增加细胞内药物浓度而逆转MDR.但多数逆转剂的毒副作用限制了它们的临床应用.中西医结合治疗肿瘤较中医或西医单独应用疗效佳,但对多药耐药肿瘤细胞是否有逆转作用,报道甚少.我们观察中西药结合（斑贞1号+5FU+TMP）对SGC7901/ADR细胞MDR的逆转及诱导凋亡作用. 1材料和方法 1.1材料人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR细胞由第四军医大学西京医院消化研究所惠赠.TMP注射液,北京永康药业有限公司产品.5FU注射液,南通精华制药有限公司产品
4、.阿霉素（ADM）注射液,汕头经济特区明治医药有限公司产品.斑贞1号合剂（斑蝥0.06g,露蜂房12g,山茱萸,女贞子各15g）,内蒙古包头医学院第一附属医院中医科制备,含原药200g/L.RPMI1640,美国Gibco公司产品.MTT,DMSO,胰蛋白酶,美国Sigma公司产品.新生小牛血清,杭州四季青生物研究所产品.流式细胞仪试剂盒,Exalpa公司产品.倒置显微镜,重庆光学仪器厂产品.酶标仪,美国Biotek公司产品.流式细胞仪,美国BD公司产品.Hitachi750透射电镜,日本日立公司产品. 1.2方法将SGC7901/ADR细胞置于含1
5、.0mg/LADM,100mL/L新生小牛血清,100kU/L青霉素,100mg/L链霉素的RPMI1640细胞培养液中,37℃,50mL/LCO2饱和湿度孵箱内培养.实验两周前培养于不含ADM的细胞培养液中.取对数生长期的SGC7901/ADR细胞,以5×107/L接种于96孔板上,培养24h,实验孔按下列分组加入药物：(1)空白对照组,(2)阴性对照组,(3)5FU组（10～105μg/L）,(4)斑贞1号组（10～105μg/L）,(5)斑贞1号（10～105μg/L）＋5FU（10～105μg/L）组,(6)斑贞1号（10～105μg/L）
6、＋5FU（10～105μg/L）＋TMP(终浓度300mg/L)（参照临床用量的血峰浓度设定实验药物浓度）.各浓度设5个平行孔,培养48h,加入5g/LMTT20μL,作用4h后加入DMSO150μL,摇床摇匀,以酶联免疫仪490nm波长测定各孔吸光度A值［3］.光镜下动态观察并拍照.计算不同浓度下细胞的存活率SR［4］［SR=(实验组A值/对照组A值)×100%］、半数抑制浓度IC50及逆转倍数RI(RI=单独用药IC50/联合逆转剂后IC50). 1.2.1细胞周期的分析收集经过不同浓度药物处理的SGC7901/ADR细胞,PBS洗涤后,700
7、mL/L冷乙醇固定过夜,离心去乙醇,加入10mg/LRNA酶溶液及碘化丙啶（PI）染液，黑暗避光37℃水浴20min,经特制的尼纶网滤器过滤（冰上操作）于检测管内,上流式细胞仪检测DNA含量和细胞周期,资料用Cellquest软件进行分析. 1.2.2细胞形态变化将SGC7901/ADR细胞以5×107/L传代4瓶,2瓶对照,2瓶用药.孵育24h后,用药组加入斑贞1号（终浓度0.5mg/L）+5FU（终浓度0.5mg/L）+TMP（终浓度300mg/L）共4mL,对照组更换培养液4mL.培养48h后收集胰酶消化脱壁细胞,25g/L戊二醛预固定,继用
8、20g/L俄酸固定,经梯度酒精脱水后用EPON812包埋,制作超薄切片（600A
