茶多酚对hl60-vcr细胞多药耐药的逆转作用的论文

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1、茶多酚对HL60/VCR细胞多药耐药的逆转作用的论文茶多酚对hl60/vcr细胞多药耐药的逆转作用【关键词】多药耐药;hl60/vcr;茶多酚;bcl2;bax【摘要】目的探讨中药茶多酚(tp)对多药耐药细胞系hl60/vcr多药耐药的逆转作用。方法hl60细胞反复暴露于浓度递增的长春新碱(vcr)培养液中,建立多药耐药细胞系hl60/vcr;不同剂量tp处理hl60/vcr细胞，mtt法检测tp对hl60/vcr细胞多药耐药的逆转作用;流式细胞仪检测tp对hl60/vcr细胞p糖蛋白(p

2、gp)，多药耐药蛋白(mrp)，人肺耐药蛋白(lrp)表达的影响;rtpcr检测tp对hl60/vcr细胞bcl2基因表达的影响。结果hl60/vcr细胞系对多种化疗药物产生耐药;pgp在hl60/vcr细胞中的相对荧光强度(rfi)明显高于hl60细胞，是hl60细胞的24.65倍;hl60/vcr的bcl2mrna表达水平增高，baxmrna表达水平下降;5μg/mltp使hl60/vcr细胞对vcr、阿霉素(adr)、vp16的耐药逆转倍数分别为2.367、1.490和1.667;7

3、.5μg/mltp使hl60/vcr细胞对vcr、adr、vp16的耐药逆转倍数分别为9.057、2.257和6.004;tp剂量依赖性地降低hl60/vcr细胞mrp表达的影响;5、7.5μg/mltp可下调hl60/vcr细胞bcl2mrna表达水平。.结论hl60/vcr细胞对多种抗癌药耐药，其多药耐药的机制可能与增加pgp的表达水平及增加bcl2/bax比值有关;tp对多药耐药细胞hl60/vcr具有逆转作用，可能的机制是降低pgp的表达水平，下调bcl2mrna表达。【关键词】多药

4、耐药;hl60/vcr;茶多酚;bcl2;bax　急性白血病患者体内抗凋亡蛋白bcl2表达增高〔1〕，抑制肿瘤细胞凋亡，从而导致肿瘤细胞多药耐药(mdr)。han〔2〕发现，磷酸化的蛋白激酶(akt)通过上调bcl2表达，导致胃癌细胞的mdr。采用长春新碱反复短期暴露法处理人白血病细胞株(hl60),建立了mdr细胞系hl60/长春新碱(vcr)。茶多酚(tp)具有清除活性氧、自由基的功效，具有抗癌、抗心血管疾病、提高机体免疫功能、延缓衰老等功能。有研究发现〔3〕，tp及其单体表没食子儿茶素通过减弱m

5、dr1基因表达，抑制p糖蛋白(pgp)atp酶活性，逆转人口腔表皮癌细胞株(kba1)的mdr性。tp对hl60/vcr基因表达的影响未见报道。本研究用不同浓度的中药tp处理hl60及hl60/vcr细胞，探讨tp逆转hl60/vcr细胞mdr的可能机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　vcr(上海华联制药公司)、阿霉素(adr，连云港制药厂)、阿克拉霉素(acr，深圳万乐药业公司)、vp16(连云港制药厂)、高三尖杉酯碱(hht，杭州民生)、长春地辛(vds，杭州民生)，tp(浙江莫干山制药

6、厂，纯度≥99%)。噻唑蓝(mtt，sigma公司)，逆转录酶，trizol试剂(invitrogen公司);rpmi1640(gibco公司);小牛血清(杭州四季青公司);100bpdnaladder(bebco公司);兔抗人pgp，兔抗人多药耐药蛋白(mrp)，兔抗人肺耐药蛋白(lrp)，异硫氰酸荧光素(fitc)标记二抗(中山生物技术公司)。　　1.2方法　　1.2.1细胞株及培养条件　　hl60细胞株保存于本室。细胞于含10%新生小牛血清的rpmi1640培养液中，37℃,全湿度，5%co2培养箱培养

7、。　　1.2.2mdr细胞系hl60/vcr的建立　　〔4〕取对数生长期hl60细胞,在含2μg/mlvcr的rpmi1640完全培养液中，37℃，全湿度co2培养箱培养2h，然后将细胞移至无药条件下培养，待细胞恢复生长后，反复用vcr处理，同时增加药物浓度，直到获得耐药性，维持培养于1μg/ml的培养液中。进行各项实验前，细胞无药培养7d。　　1.2.3mdr检测　　选用vcr、adr、vp16、hht、vds、acr等6种药物进行检测。对数生长期hl60/vcr和hl60细胞悬液1×105/ml，接

8、种于96孔板，每孔0.1ml。每种化疗药物在100μg/ml至0.01μg/ml间按1∶10逐级稀释成6个浓度梯度，每种浓度各加5复孔。37℃,全湿度，5%co2培养箱培养48h。mtt法计算出半数抑制浓度(ic50)及耐药倍数(rf)。rf=ic50(hl60/vcr)/ic50(hl60)。　　1.2.4pgp、mrp、lrp表达测定　　收集细胞，用磷酸缓冲液将