健脾解毒方逆转大肠癌细胞多药耐药的作用机制-论文.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第33期健脾解毒方逆转大肠癌细胞多药耐药的作用机制李先茜，吴嘉熙。范忠泽，孙燕妮，高虹(1上海市徐汇区中心医院，上海200031；2上海中医药大学附属普陀医院)摘要：目的探讨中医健脾解毒方逆转大肠癌多药耐药(MDR)的机制。方法采用细胞生长抑制实验观察长春新碱在健脾解毒方治疗前后对大肠癌耐药细胞株(HCT一8／V)敏感性的改变，实时荧光定量PCR及Westernblot方法观察健脾解毒方对大肠癌细胞Akt磷酸化程度及MDR1基因表达的影响。结果健脾解毒方药物血清与大肠癌细胞培养24、48、72h后，长春新碱对细胞

2、的生长抑制率分别为5．9％、11．0％、15．0％，明显高于空白对照组(P均<0．05)，其抑制作用与健脾解毒方的药物血清浓度及作用时间呈正相关。健脾解毒方血清能有效降低HCT．8／V中MDR一1的蛋白及mRNA表达(P<0．05)；健脾解毒方逆转MDR一1的表达与其所致的细胞内Akt磷酸化水平下降呈正相关，与长春新碱敏感性提高呈线性负相关。健脾解毒方血清与PI3K抑制剂LY294002联用能协同降低HCT．8／V中MDR一1的表达水平和细胞内Akt磷酸化程度，较单用更能增加长春新碱的敏感性。结论健脾解毒方能有效减低耐药肿瘤细胞内Akt磷

3、酸化，从而降低PI3K／Akt信号通路活性，后者进一步导致MDR1表达下降，从而增加长春新碱对大肠癌细胞的敏感性。关键词：大肠肿瘤；健脾解毒方；多药耐药基因；PI3K／Akt信号因子doi：10．3969／j．issn．1002—266X．2014．33．005中图分类号：R735．3文献标志码：A文章编号：1002-266X(2014)33-0013-04MechanismofmultidrugresistanceofcoloncancercellreversedbyJianpijieduHerbL／Xian—qian。，Jia—xi，

4、FANZhong—ze，SUNYan—ni，GAOHong(1ShanghaiXuhuiCentralHospital，Shanghai200062，China)Abstract：ObjecfiveToinvestigatethemechanismofwhichChinesetraditionalmedicine，Jianpijiedu(JBJD)herbprotocolreversesmultidrngresistance(MDR)ofcoloncancer．MethodsSensitivityofVincristinetocolonc

5、ancercells(HCT．8／V)weredetectedbycellgrowthinhibitionmetodsbefororafterthetreatmentofJianpijieduHerb．Expressionofmultidruggene1(MDR一1)andphosphorylationofAktincancercellwerestudiedbyeitherreal—timePCRorWesternblot．ResultsAfterHCT一8／Vwasco—culturedwithserumcontaining20％ofJ

6、BJDfor24h，48hand72h，inhibitionratesonproliferationofHCT。8／VresultedbyVincristinewere5．9％，11．0％and15．0％，respectively，andallhigherthanthatoftheblankcontrolgroup(allP<0．05)．InhibitingcellgrowthofVincristinewaspositivelycorrelatedtotheco-culturetimeandtheserumconcentrationofJ

7、BJD．JBJDdown—regulatedtheexpressionofMDR一1proteinandmRNAinHCT．8／V(P<0．05)．ExpressionofMDR一1waspositivelyrelatedwiththedecreaseddegreeofAktphosphorylationinducedbyJBJD，andnegativelycorrelatedwithsensitivityofVincristine．JBJDcombinedwithPBKinhibitor(LY294002)resultedinsigni

8、ficantdeductionofMDR-1expressionatmRNAandproteinlevels(P—gP)andAktphosphorylation(p-Akt)，andenha