小白菊内酯对胃癌耐药逆转作用及机制

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1、分类号R735.2单位代码：10159密级：公开学号：200710210博士学位论文中文题目：小白菊内酯对胃癌耐药逆转作用及机制英文题目：Reversaleffectandmechanismofparthenolideongastriccancermultidrugresistance论文作者：刘明华指导教师：李岩教授学科专业：内科学完成时间：2018年11月中国医科大学博士学位论文小白菊内酯对胃癌耐药逆转作用及机制Reversaleffectandmechanismofparthenolideongastriccancermultidrugresist

2、ance论文作者刘明华指导教师李岩教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向消化内科论文起止时间2009年3月—2018年11月论文完成时间2018年11月中国医科大学（辽宁）2018年11月中国医科大学博士学位论文摘要目的：胃癌在全世界范围内是发病率最高的癌症之一，我国的胃癌发病率高、转移率高、死亡率高和早诊率低、根治切除率低、5年生存率低等特点。进展期胃癌的治疗是我们面临的巨大挑战。小白菊内酯(Parthenolide,PTL)是分离自艾菊、篙属、观光木、欧洲小白菊等药用植物，具有抗炎、抗病毒、氧化应激、诱导凋亡、

3、抗肿瘤及免疫调节等作用。对于来自血液、肠道、肝脏，乳腺，前列腺，血液等的多种肿瘤细胞的增殖有抑制效应。小白菊内酯可通过抑制NF-κB信号通路，发挥其抗肿瘤侵袭、转移、药物抗性等作用，且PTL基本不损伤正常细胞，故PTL在将来肿瘤治疗中具有重大意义，但目前，PTL对胃癌的抗肿瘤及化疗耐药等研究方面较少，为了探讨PTL在逆转胃癌化疗耐药中的作用，我们通过研究PTL对胃癌细胞SGC7901对顺铂(DDP)的敏感性的影响；以及胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP、SGC7901/ADR耐药性的影响，并通过对P-gp、MRP、Bcl-2、CyclinD1、NF-κ

4、B、Caspase-8表达及活性检测，探讨PTL是否可增加胃癌细胞对顺铂的敏感性，以及逆转胃癌耐药细胞多药耐药的作用及其机制。研究方法：本研究利用MTT法检测PTL、DDP、ADR单独及联合对胃癌细胞的增殖抑制率的影响，培养胃癌细胞株SGC7901、SGC7901/DDP、SGC7901/ADR细胞株，加入96孔板，实验组加入不同浓度的PTL、DDP、ADR、PTL+DDP、PTL+ADR，对照组则加等量培养液，干预48小时后，检测吸光度（OD）值并计算增殖抑制率。并用流式细胞仪检测PTL、DDP、ADR单独及联合对胃癌细胞的凋亡的影响，消化收集PTL、

5、DDP、ADR、PTL+DDP、PTL+ADR处理48h的SGC7901、SGC7901/DDP、SGC7901/ADR细胞，AnnexinV-FITC/PI染色后，流式细胞仪检测，分析细胞凋亡百分比。采用体外逐步增加顺铂药物浓度反复间歇诱导法，建立胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP。并采用MTT法测定SGC7901/DDP、SGC7901/ADR对各种化疗药物的耐药指数，观察冻存、撤药对SGC7901/DDP耐药性的影响。Westernblot方法检测P-gp、MRP、Bcl-2、CyclinD1蛋白的表达。收集对照组、PTL、DDP、PTL+DDP

6、处理48h的SGC7901细胞蛋白，用Westernblot方法检测Bcl-2蛋白的表达。收集不同浓度PTL处理48h的SGC7901/DDP、I中国医科大学博士学位论文SGC7901/ADR细胞蛋白，以未处理的SGC7901细胞蛋白为对照组，检测P-gp、MRP、Bcl-2、CyclinD1蛋白的表达。EMSA检测NF-κB活性，收集对照组、PTL、DDP、PTL+DDP处理48h的SGC7901细胞蛋白，电泳迁移率实验（EMSA）检测NF-κBDNA-蛋白结合活性。收集不同浓度PTL处理48h的SGC7901/DDP、SGC7901/ADR细胞，以未

7、处理的SGC7901细胞为对照组，电泳迁移率实验（EMSA）检测NF-κBDNA-蛋白结合活性。分光光度法检测Caspase-8的活性，收集对照组、PTL、DDP、PTL+DDP处理24h、48h的SGC7901细胞，分光光度法检测Caspase-8的活性。本研究结果均以mean士SD表示，应用t检验进行两组间比较。方差分析进行多组间比较采用，应用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。结果：PTL对SGC7901细胞有增殖抑制作用，小剂量PTL可增加DDP的药物敏感性。小白菊内酯和顺铂抑制SGC7901细胞作用呈浓度依赖关系，PTLIC50为17.4±

8、1.04µmol/L，DDPIC50为2.61±0.26mg/L，PTL10µm