PDIA3基因对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：PDIA3基因对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究PDIA3geneontheproliferationandtheapoptosisofcolonicmucosalepithelialcellsintheexperimentats作者姓名：黄振范指导教师姓名：姜海平及学位、职称：教授博士生导师主任医师学科、专业名称：外科学（普通外科）学位类型：专业学位论文提交日期：论文答辩日期：2017.05.28答辩委员会主席：刘海鹰教授论文评阅人：学位授予单位和日期：暨南大学独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除

2、了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：2018年07月04日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文

3、作者签名：导师签名：签字日期：2018年07月04日签字日期：2018年07月04日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：暨南大学硕士学位论文PDIA3基因对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究中文摘要背景与目的：短肠综合征（shortbowelsyndrome,SBS）是指大部分小肠由于物理或功能性损失，致使小肠有效吸收面积过少进而出现的营养不良综合征。临床上以腹泻、水电解质紊乱、吸收障碍和进行性营养不良为主要特点。通常，当残余肠道长度≤35cm时可以定义为超短肠综合征（ultrashortbowelsyndrome,USBS）。当前，临床上对于SBS的治疗以非手术治疗

4、为主，而其中主要依靠于肠外营养（Parenteralnutrition,PN）为SBS患者提供额外的营养补充，维持生理代谢需求。但PN同时也是一种高风险、昂贵和存在众多潜在不足的治疗方法。例如PN相关的导管性感染、肠粘膜萎缩、肝衰竭等，这些严重威胁了SBS患者的生命。尤其是对于USBS患者，由于剩余小肠极短或完全丧失小肠，终生需要依赖于PN并遭受上述风险的打击。所以，寻找一种安全、有效的方法促使此类患者残余结肠功能的代偿，使其减少对PN的使用或者摆脱对PN的依赖，是对USBS患者治疗的一种新思路。我们课题组前期研究通过构建USBS大鼠模型已经证实剩余结肠不论是在形态还是在功能上都可以发生代偿变

5、化，并发现蛋白质二硫键异构酶A3（ProteindisulfideisomeraseA3,PDIA3）显著高表达于代偿的结肠组织中。PDIA3作为ER常驻氧化还原伴侣，研究已经证实其参与着众多关乎细胞生存的信号传导和调控环节，对细胞具有潜在促增殖的作用。那么，PDIA3在USBS结肠代偿中是否也作为关键调控蛋白而发挥着促结肠代偿的作用呢？我们既往的研究通过上调和下调结肠癌细胞（SW480）中PDIA3的表达，发现PDIA3对SW480细胞具有促进增殖和抑制凋亡的作用。那么，PDIA3在人正常结肠粘膜上皮细胞中是否也具有同样的作用呢？本实验通过构建过表达和沉默质粒，双向调控PDIA3在人正常结肠

6、粘膜上皮细胞（NCM460）中的表达量，观察其对NCM460细胞是否同样能产生促进增殖并抑制凋亡的作用。为进一步研究PDIA3在结肠代偿中是否作为关键蛋白而发挥作用提供实验依据。方法：1.构建真核细胞过表达质粒（PDIA3-GV141）和沉默质粒（PDIA3-shRNA），I暨南大学硕士学位论文PDIA3基因对结肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡影响的实验研究使用DNA测序验证构建的成功与否；2.培养NCM460细胞系，使用脂质体瞬时转染技术将过表达质粒及沉默质粒分别转染NCM460细胞；3.Westernblotting方法分别检测转染不同剂量过表达和沉默质粒后细胞PDIA3蛋白表达量的变化情况；4.

7、CCK-8法分别检测转染不同剂量过表达和沉默质粒后24h、48h、72h的细胞增殖率；5.流式细胞技术分别检测转染不同剂量过表达和沉默质粒后细胞的凋亡率。结果：1.DNA测序验证成功合成真核细胞过表达质粒（PDIA3-GV141）和沉默质粒（PDIA3-shRNA）。2.Westernblotting条带提示：过表达实验中，实验组NCM460细胞PDIA3的表达量高于空载体组，且与转染质粒的剂量呈