甘氨酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及免疫因子基因表达影响的研究

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1、内蒙古农业大学．研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：．违盥盘日期：竺!生：生：丝内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文

2、工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：鎏璺璺童指导教师签名：{薹垂主妄=万日期：直!塑．兰：／D摘要111111IIIJ111IIIIIIIIIIIIIIIIY2600723本研究是以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为试验对象，探究甘氨酸(Gly)对奶牛

3、乳腺上皮细胞增殖、凋亡以及免疫应答的影响。试验分别测定了Gly培养乳腺上皮细胞后，细胞的增殖活性、细胞周期变化、细胞凋亡率以及四种免疫因子(IL．1B、IL．6、IL．8、TNF．0【)的基因表达量，旨在阐明Gly是否参与奶牛乳腺上皮细胞的生长和免疫调节过程以及对乳腺上皮细胞免疫应答产生的影响。本论文的研究内容和结果如下：1、胶原酶消化法分离出奶牛乳腺上皮细胞，培养基中添加0、1、2、5、10和20mmol／L的Gly后在体外条件下培养细胞24、48和72h，用MTT法检测细胞增殖活性。结果表明，Gly对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性有低浓度(1mmol／L)

4、促进，高浓度(10．20mmol／L)显著抑制的作用(-P

5、验中，Gly浓度为20mmol／L时细胞凋亡率最大。4、不同浓度Gly(0、l、2、5、10和20mmol／L)培养奶牛乳腺上皮细胞后，提取出总RNA，经反转录成cDNA后，采用Real．TimePCR法检测免疫因子IL一113、IL一6、IL．8、TNF．c【的基因表达量，所得PCR产物用于琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明，体外培养的奶牛乳腺上皮细胞具有分泌IL．1B、IL一6、IL-8、TNF．Ol的能力，Gly可以显著上调这四种免疫因子的基因表达水平(P<0．05)，Gly浓度为5mmol／L时，对这四种免疫因子基因表达水平的上调作用最强。关键词：甘氨

6、酸；奶牛：乳腺上皮细胞；细胞增殖；细胞周期；细胞凋亡；免疫应答EffectsofGlycineonProliferation，ApoptosisandGeneExpressionofImmunefactorsofMammaryEpithelialCellsinDairyCowAbstractThemammaryepithelialcellsofdairyCOW(CCMEC)wereusedfortestpurposetoexploreeffectsofglycine(Gly)onproliferation，apoptosisandimmunerespon

7、seofCCMEC．Proliferativeactivity,cycle，apoptosisrateofcellsandgeneexpressionoffourimmunefactors(IL一1p，IL一6，IL一8andTNF·0【)weredetectedafterculturedwithGlyinordertoillustrateGlywhethertoparticipateintheprocessofcellgrowthandimmuneregulation，aswellastheeffectsonimmuneresponseofCCMEC．

8、Thecontentandresultsofthispapershowedasf