tgf-β1和bfgf对奶牛乳腺细胞增殖和凋亡的影响

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1、分类号S852.3学校代码10129UDC11.220学号2009201060TGF-β1和bFGF对奶牛乳腺细胞增殖和凋亡的影响EffectsofTGF-β1andbFGFonCellProliferationandApoptosisofBovineMammaryCell申请人：李瑜学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：动物传染病与免疫病理学指导教师：王凤龙教授论文提交日期：二〇一二年四月摘要目的：培养、纯化奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞，倒置显微镜观察和绘制细胞生长曲线，了解体外培养细胞的生物学特性，探讨转化生长因子-β1(Transfergowt

2、hfactor-β1，TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(Basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)对奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞增殖和凋亡的影响，以阐明两种细胞因子对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的影响。方法：采用组织块培养法进行奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的原代培养。根据上皮细胞和成纤维细胞贴壁程度不同，利用差时胰酶消化法和差速贴壁法纯化奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞。倒置相差显微镜下观察细胞形态和鉴定细胞的来源。传至六代纯化的细胞用于实验。实验分别检测两种细胞因子TGF-β1、bFGF对纯化的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维

3、细胞的影响。结果：(1)显微镜观察及生长曲线结果显示，体外培养和纯化的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞具有典型的形态特征且具有良好的增殖能力。(2)MTT比色法检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著，随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强；奶牛乳腺成纤维细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著，随TGF-β1浓度增大促进细胞增殖作用增强；在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异不显著；奶牛乳腺成纤维细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异显著，随bFGF浓度增大促进细胞增殖作用增强

4、；(3)应用分光度法检测caspase-3活性，测定DNA片段化率检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著，随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强；在奶牛乳腺成纤维细胞中结果显示不同浓度TGF-β1实验组与对照组之间差异显著，随TGF-β1浓度增大抑制细胞凋亡作用增强；应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异不显著；在奶牛乳腺纤维细胞中结果显示不同浓度bFGF实验组与对照组之间差异显著，随bFGF浓度增大抑制细胞凋亡作用增强

5、。结论：TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖和促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡；可以促进奶牛乳腺成纤维细胞的增殖和抑制奶牛乳腺成纤维细胞凋亡。bFGF在奶牛乳腺上皮细胞的增殖和奶牛乳腺上皮细胞凋亡方面作用不明显；可以促进奶牛乳腺成纤维细胞的增殖和抑制奶牛乳腺成纤维细胞凋亡。关键词：奶牛；乳腺；上皮细胞；成纤维细胞；转化生长因子-β1；碱性成纤维细胞生长因子；细胞增殖；细胞凋亡EffectsofTGF-β1andbFGFonCellProliferationandApoptosisofBovineMammaryCellAbstractOBJECTIVE：Bov

6、inemammaryepithelialcellsandbovinemammaryfibroblastscellswereculturedandpurifiedinthestudy.Biologicalcharacteristicsofthesecellswereidentifiedbyobservingcellsinchateliertypemicroscopeanddrawingcellulargrowthcurves.ToexpoundtheeffectsofTGF-β1andbFGFonproliferationandapoptosisofbovi

7、nemammaryglandularcells.METHOD：Bovinemammarycellswereculturedbytissueblockmethodandsinglecellisolationmethod.Onthebasisofthedegreeofbovinemammaryepithelialcellsandbovinemammaryfibroblastscellsanchoredtoasurfaceweredifferent.Thebovinemammaryepithelialcellsandbovinemammaryfibroblast

8、scellswerepurifiedbydigestionwith