bfgf和celecoxib对胃癌bgc823细胞株增殖、凋亡的影响

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：型硷翌日期：2堂2：!：：／，f中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产

2、权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：丝塑：!!!量·中文论著摘要·目的胃癌是世界上第二位的常见恶性肿瘤。因此，研究胃癌发生发展的机制，对防治胃癌及癌前病变具有非常重要的意义。碱性成纤维生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFG

3、F)与肿瘤发生发展的关系极为密切。非甾体抗炎药(NSAIDs)可降低胃肠道肿瘤发生的危险性，成为近年来肿瘤防治领域的又一研究热点。celecoxib是非甾体抗炎药的一种，目前celecoxib对BGC．823胃癌细胞株凋亡的影响机制不清。本实验采取外源性bFGF和celecoxib(环氧合酶．2选择性抑制剂)作用于胃癌BGC--823细胞，观察其对胃癌BGC．823细胞株的生长，PKB活性，环氧合酶．2(cyclooxygenase，COX-2)、核转录因子r．B(nuclearfactor-r．B，NF-KB)及血管内皮细胞生长因子(vascularendoth

4、elialgrowthfactor，VEGF)表达变化的影响以及P13K／PKB信号转导通路在此过程中的作用，以探讨bFGF和celecoxib在胃癌发病机制及防治胃癌中的作用和bFGF与celecoxib之间的相互作用影响。方法l荧光显微镜观察celecoxib对胃癌BGC．823细胞株凋亡的影响。2MTT比色法观察bFGF、PKB上游激酶P13K抑制剂wortmannin、celecoxib对胃癌BGC．823细胞株增殖的影响。3流式细胞术检测celecoxib诱导胃癌BG-C．823细胞株凋亡。4Westernblot方法检测bFGF对PKB的活化作用，bF

5、GF和celecoxib诱导的COX--2、NF--rB、VEGF表达变化。结果1bFGF对PKB活性的影响：不同浓度bFGF诱导BGC．823细胞PKB活性增高。经25ng／mlbFGF诱导后磷酸化PKB表达量最大。25ng／mlbFGF与BGC-823细胞共同孵育5，10，30，60min．PKB活性在bFGF作用5min时开始升高，作用10min时达到高峰，其后活性开始下降，但均高于空白对照，各bFGF处理组与对照组之间差异具有统计学意义(P<0．205)。经wortmannin预处理后，胃癌BGC．823细胞PKB活性与未经预处理组相比降低，且差异显著(P

6、<0．05)。2MTT比色试验：显示bFGF有明显的促进BGC一823细胞增殖的作用(P<0．05)。celecoxib具有明显的抑制BGc．823细胞增殖的作用，且呈明显的剂量依赖性(P<0．05)。3细胞形态学观察加入不同浓度的celecoxib后，光镜下细胞形态发生明显变化，部分贴壁细胞收缩变圆，漂浮。荧光显微镜观测显示celecoxib处理后，细胞形态不规则，随时间和药物浓度的增加，出现凋亡细胞。4流式细胞术celecoxib作用24h可明显诱导BGC．823细胞发生凋亡，与药物浓度成正相关“=0．99，P<0．01)。对照组、25、501unol／L组的

7、细胞凋亡率分别为2．39％、33．69％、59．98％。5Western印迹分析Western印迹分析显示，bFGF能时效地诱导BGC．823细胞的COX--2、NF—KB、VEGF蛋白表达量增加。其中COX--2在24d,时、NF一心在12d,时和VEGF在24d,时分别表达量达到高峰，各bFGF作用时间点与对照比较结果有显著性差异(P<0．01)。加入celecoxib后western印迹分析结果可见随着药物浓度的升高COX--2、NF—lcB、VEGF蛋白表达水平逐渐降低，具有剂量依赖性。与对照组相比25、501unol／L组中COX--2、NF--r,B、

8、VEGF蛋