奶牛pots的表达及小肽对乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响

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1、＇．：技：；；瞧；分类号１：＾；＾．Ｍ＿女学＜苦窜—乂．ＵＤＣ—密级這．．…．．‘，矣；．？义葦＾緩叫＂？。＿峽。‘炭兴＂一；硕壬学化文這＇户ｖ＞；非．詞‘＾＿．；＞（学术型）ｙ／（：产《巧起、呜？节／巧話奶牛ＰＯＴＳ的表达及小肪对乳腺上皮细胞／占＾言：ｋ＇Ｅ蛋自合劇影旷：Ｖ琴鑛心ｖｆ＃違灌乃学私＇成樂一－？＇＊？一－？＞？一．，ｉ／９？’一．－－＾－－Ｊ＇＂－江苏扬州．指导教师姓名；赵国诗教授：，扬州大学，，２巧００９：＾：山＇一霍永久副教授－，扬州

2、大学，江苏扬州，２巧００９如申请学位级别；硕壬学科专业名称；动物营养与饲料科学＿？－—，＞、、－心论文提交日期：２０１５年Ｓ月论文答辩日期：２０１５年５月２６日；／学位授予单位：扬州大学学位授予日期：２０巧年６月２４日—－答辩委员会主席：崖．教授．．．矣心＇＇必难若心喪接：於若、．过－、＾２０１５年６月户一；＾Ｊ？，－．心．乃，．…；？Ｃ、起．／考基Ｖ齐户趙‘荀観堯兹廟奶牛ＰＯＴＳ的表达及小肤对现腺上皮细胞乳蛋白合成的影响［奶牛ＰＯＴＳ的表达及小狀对乳腺上皮细胞郭蛋白合成

3、的影响研究生：郭静导师：趋国埼教授霍永久副教授（扬州大学动物科学与技术学院）摘要ｒｏ－本试验研究了奶牛各组织小肤转运蛋白（ｐｔｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ，ＰＯＴｓ）的表达，并通过二化培养奶牛到ｉ腺上皮细胞系（ｂｏｖｉｎｅｍａｍｍａｒｙｅｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ｐＢＭＥＣ），研究小肤对ＢＭＥＣ乳蛋白合成的影响。为ＰＯＴｓ在奶牛组织中的功能性研究提。：供依据，并为小肋在ＢＭＥＣ中的转运机制提供参考研究包含３个试验，具体如下一试验研巧ＰＯＴｓ在奶牛乳腺沮织（ｍａｍｍａｒ

4、ｌａｎｄ，ＭＧ）及ＢＭＥＣ中的定位和表［］ｙｇ达分析。在无茜条件下分离脂肪较少且富含乳腺小叶的ＭＧ进行纯化培养，应用免疫巧光法研充ＰｅｐＴｌ和ＰｅｐＴ２蛋白在ＭＧ及ＢＭＥＣ中的分布，应用实时巧光定量ＰＣ民和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法研究ＰｅｐＴｌ和ＰｅｐＴ２在ＭＧ及ＢＭＥＣ中的表达。结果表明，ＰｅｐＴｌ分布于ＭＧ的小；ｅｌｅ２均分布于叶间结缔组织，ＰｅｐＴ２分布于ＭＧ的乳导管及腺泡腔上皮细胞ＰｐＴ和ＰｐＴＢＭＥＣ的细胞质和细胞膜；实时巧光定量ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ＰｅｐＴｌ和ＰｅｐＴ２在ＭＧ和ＢＭＥＣ中均有表达。

5、试验二研巧ＰＯＴｓ在奶牛组织中的定量分析。屠宰４头健康的３月龄荷斯坦横牛，采［］、右脏、肝脏、肾脏、脾脏、脚腺、乳腺（采自２头泌乱后期淘化奶牛）、抓集奶牛、肺脏肉组织及瘤胃、网胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠的黏膜层。应诏、瓣胃、皱胃实时英光定量ＰＣＲ法硏究ＰｅＴｌ、ＰｅＴＴ２、ＰＨＴ１和ＰＨＴ２ｍＲＮＡ在各组织中的表达差异。ｐｐ结果表明，ＰｅＴｌｍＲＮＡ在奶牛空肠和十二指肠中表达量极显著高于圓銜、瘤胃、姉脏、ｐ、皱胃、结肠、瓣胃、肝脏、盲肠、网胃、胸腺、脾脏、肾脏、乳腺、屯脏和肌肉＇Ｐｅ２ｍＲＮＡ在奶牛现腺中表达量极显

6、著高于肾脏、肝脏、肺脏、脾脏、回厥、ＩＳ胃、胸ｐＴ腺（户＜０．０１）ＰＨＴ１ｍＲＮＡ、十二指肠、网胃、盲肠、也脏、空肠、结肠、瓣胃、肌肉和瘤胃；、＜０）在奶牛脾脏、盲肠和肺脏中表达量极显著髙于屯脏和肌肉（户．０１ＰＨＴ２ｍＲＮＡ在奶；牛肺脏、盲肠和胸腺中表达量极湿著高于瘤胃、皱胃、网胃、也脏和肌肉（户＜０．０１）。－Ｍｅ－试證习研究二狀对ＢＭＥＣ乳蛋白合成的影响。不同浓度Ｍｅｔｔ、ＶａｌＭｅｔ和Ｌｅｕ［－－－ｅＢＭＥＣ验分为二肤组（ＭｅｔＶａＭｔ分别培养二肤浓度基础上ＭｅｔｌＭｅｔ，，在最佳，试，－－－ｅｕ－ｅｔＬＭ），１

7、／２二狀＋１／２氨基酸组（ＭｅｔＭｅｔ／Ｍｅｔ、Ｍｅｔ，ＶａｌＭｅｔ／Ｖａｌ、Ｍ幻，ＬｅｕＭｅｔ／Ｌｅｕ、Ｍｅｔ），氨基酸组（Ｍｅｔ、Ｍｅｔ，Ｖａｌ、Ｍｅｔ，Ｌｅｕ、Ｍ幻），分别刺激培养ＢＭＥＣ，比较研究ＩＩ扬州大学硕±学位论文ｅ－ｅｔ／Ｍｅ－蛋白合成相关基因ｍＲＮＡ表达差异。结果表明：ＭｔＭｔ、Ｍｅｔ组ｍＴＯＲ、ＥＩＦ４Ｅ、－－ｅｅｔ－Ｓ化１和ＳＯＣＳ３基因表达量极显著高于ＭｅｔＭｔ组和Ｍ、Ｍｅｔ组（ｆ＜０．０１）ｎＶａｌＭｅｔ／Ｖａｌ、－ｅＫ－－４ＥＭｔ组酪蛋白、封ＦｍＲＮＡ表达量极显著高于ＶａｌＭｅｔ组和Ｖａｌ、Ｍｅ

8、ｔ组（户＜０．０１）；Ｖａ－－＜ｌＭｅｔ／Ｖａｌ