小G蛋白RagD对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响.pdf

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1、ⅥnⅣw．chinadairy．net中国乳品工业zgrpgy@163．corndq：ryINDUSTRYG蛋白RagD对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响穆莹，徐渐，许岩(东北农业大学食品学院，哈尔滨150030)摘要：以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型，研究了RagE)对细胞中B一酪蛋白(CSN2)的合成及蛋氨酸调节CSN2合成信号通路的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT—PcR)和蛋白质免疫印迹f、邪)检测添加蛋氨酸后细胞中CSN2与RagD的表达；对RagD进行过表达和抑制，用qRT—PCR和WB检测细胞中CSN2、mTOR和p—mToR的表达。结果表明：添加蛋氨酸使细胞中CSN2和R

2、agD的表达显著增加；RagD过表达时，细胞中CSN2与p—mTOR的表达显著增加，mToR表达变化不显著，此时添加蛋氨酸，细胞中CSN2与p—mTOR的表达继续显著增加；RagD抑制时，细胞q-CSN2与p-mTOR的表达显著下降，mTOR表达变化不显著(p>0．05)，此时添加蛋氨酸，不能使细胞q-CSN2与p-mTOR的表达恢复。RagD作为信号分子，能接收并传递蛋氨酸信号，使细胞中mTOR磷酸化，正向调节奶牛乳腺上皮细胞中CSN2的表达。关键词：RagD；奶牛乳腺上皮细胞；口一酪蛋白；蛋氨酸中图分类号：Q93—33文献标识码：A文章编号：1001—2230(2014)11-0013-0

3、4EfectsofsmallGproteinRagDonmilkproteinsynthesisinbovinemammaryepithelialcellsMUYing，XUJian，XUYan(FoodCollegeofNortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：TheexperimentwasconductedtoinvestigatetheefectsofRagDonmilkproteinsynthesisandthesignalingpathwayofmethio—nineregulate／3一casein(C

4、SN2)synthesisinbovinemammaryepithelialcellsculturedinvitro．TheexpressionofCSN2andRagDwerede—tectedbyreal—timequantitativePCR(qRT—PCR)andwesternblotting(WB)incellstreatedwithmethionine．TheexpressionofCSN2，mTORandp-mTORweredetectedbyqRT-PCRandWBincellsafterRagDoverexpressionandinhibition．Theresultssho

5、wedasfol—lows：theexpressionofCSN2andRagDweresignificantincreaseaftertreatedwithmethionine．TheexpressionofCSN2andp-mTORweresignificantincreasesandsignificantdecreases，afterRagDoverexpressionandinhibition，buttheexpressionofmTORwasnosignificantchange．InRagDoverexpressiongroup，theexpressionofCSN2andp-mT

6、ORweresignificantincreases(P<0．01)aftermethioninethewasadded，butinRagE}inhibitiongroup，theexpressionofCSN2andP—mTORwerenoincreasesaftermethioninethewasadded．TheStUdysuggeststhatassignalingmolecules，RagDcanreceiveandpassmethioninesignal，phosphorylationthemTOR，andpositivelyregulatetheex—pressionofCSN2

7、inbovinemammawepithelialcels．Keywords：RagD；boginemammawepithelialcels；／3一casein；methionine养的泌乳奶牛乳腺上皮细胞为材料，研究RagD对蛋0引言氨酸通过roTOR信号通路调节p～酪蛋白合成的影乳中乳蛋白含量的高低是衡量牛奶品质好坏的响。本研究完善了人们对氨基酸调节乳蛋白合成的一个重要指标。在奶牛乳腺上皮细胞中