β羟丁酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成相关基因表

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1、动物营养学报２０１４，２６（１２）：３８３６⁃３８４２ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１４．１２．０３８β－羟丁酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成相关基因表达量的影响∗王新朋闫素梅齐利枝生冉赵艳丽（内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特０１００１８）摘要：本试验研究了不同浓度的β－羟丁酸（ＢＨＢＡ）对奶牛乳腺上皮细胞（ＢＭＥＣ）内乳蛋白合成相关基因表达量的影响。将传至第３代的ＢＭＥＣ以适宜的密度培养４８ｈ后，随机分为６组，每组６个重复

2、，每个重复１个培养孔。各组分别采用ＢＨＢＡ浓度为０（对照组）、０．５８、１．１６、２．３２、４．６４和９．２８ｍｍｏｌ／Ｌ的培养液，置于３７℃、５％ＣＯ培养箱中继续培养４８ｈ。收集细胞，２采用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时荧光定量ＰＣＲ法测定乳蛋白合成相关基因的表达量。结果表明：随着２ＢＨＢＡ浓度的增加，αｓ１－酪蛋白（ＣＳＮ１Ｓ１）基因表达量呈显著的一元二次曲线增加（Ｒ＝０．９３１６，Ｐ＝０．０１８），其中以２．３２～９．２８ｍｍｏｌ／Ｌ组较高，尤以４．６４ｍｍｏｌ／ＬＢＨＢＡ组最高。随着２ＢＨＢＡ浓度的增加，瘦素（ｌｅｐｔｉｎ）

3、基因表达量呈一定的一次线性降低趋势（Ｒ＝０．４８２５，Ｐ＝０．１２６），从数值上看，以０．５８ｍｍｏｌ／ＬＢＨＢＡ组最高。信号转导和转录激活因子５（ＳＴＡＴ５）和哺乳动物雷帕霉素靶点（ｍＴＯＲ）基因表达量与ＢＨＢＡ浓度间的回归关系不显著（Ｐ＝０．４５９，Ｐ＝０．３９８）。综合以上指标，ＢＨＢＡ的浓度为２．３２～９．２８ｍｍｏｌ／Ｌ可上调ＣＳＮ１Ｓ１基因的表达，尤以ＢＨＢＡ浓度为４．６４ｍｍｏｌ／Ｌ时对ＢＭＥＣ内乳蛋白合成的促进效果最好。关键词：β－羟丁酸；奶牛；乳腺上皮细胞；乳蛋白中图分类号：Ｓ８２３；Ｓ８５２．２文献标识码

4、：Ａ文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１４）１２⁃３８３６⁃０７［３－７］随着人们生活水平的提高和健康意识的加关基因的表达，但研究结果不尽一致，影响机强，对牛奶质量的要求也越来越高，而乳蛋白的含理也尚不清楚。β－羟丁酸（ＢＨＢＡ）是奶牛乳腺内量是衡量牛奶品质的重要指标。乳成分前体物脂肪酸从头合成的前体物，主要由瘤胃上皮细胞（ＭＣＰ）的含量和组成直接影响乳腺内乳蛋白等乳吸收的丁酸转化而来，但目前关于ＢＨＢＡ影响乳［８］成分的合成，进而影响乳品质。因此，深入研究乳成分的研究报道很少。孔庆洋等的研究结果表成分前体物对改善牛奶品质具

5、有重要意义。以往明，不同浓度的丁酸钠（０～１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）可显著的研究多数集中在乳脂前体物（ＭＦＰ）对乳脂肪合增加奶牛乳腺上皮细胞（ＢＭＥＣ）胞外甘油三酯成的影响方面，对乳蛋白影响的系统研究报道极（ＴＡＧ）的合成，同时上调脂肪酸合成酶（ＦＡＳＮ）和少。然而，许多研究发现ＭＦＰ不仅对乳脂肪的合乙酰辅酶Ａ羧化酶α（ＡＣＡＣＡ）的基因表达；但对成有影响，也会对乳蛋白和乳糖的合成产生影乳蛋白合成方面的影响研究尚未见资料报道，值［１－２］响。一些体外研究资料也报道，单一ＭＦＰ如得进一步探讨。哺乳动物雷帕霉素靶点（ｍＴＯＲ）乙酸、

6、油酸、硬脂酸和棕榈酸等不仅对奶牛乳腺内是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，由２种不同的多［９］乳脂合成有显著影响，而且也影响乳蛋白合成相蛋白复合体ｍＴＯＲＣ１和ｍＴＯＲＣ２组成，在调节收稿日期：２０１４－０６－２７基金项目：奶业“９７３计划”（２０１１ＣＢ１００８００）作者简介：王新朋（１９８９—），男，山东莱芜人，硕士研究生，从事反刍动物营养的研究。Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｗｘｐ０６１１＠１２６．ｃｏｍ∗通讯作者：闫素梅，教授，博士生导师，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｙａｎｓｍｉｍａｕ＠１６３．ｃｏｍ１２期王新朋等：β－羟丁酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞内乳

7、蛋白合成相关基因表达量的影响３８３７［１０］乳蛋白合成方面起重要作用。信号转导和转录敏感性不同，纯化ＢＭＥＣ并进行传代。本试验采激活因子５（ＳＴＡＴ５）属于信号转导和转录激活因用第３代传代细胞进行研究，细胞经荧光免疫细子家族，是乳腺中负责催乳素信号转导的主要转［１３］胞染色法鉴定，为ＢＭＥＣ。将传至第３代的录因子，其信号转导通路可以被许多细胞因子、生ＢＭＥＣ，用含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液制成［１１］长因子和激素激活，并在潜在的调节乳蛋白合细胞悬液，按照测试指标的要求调整细胞密度接成方面起重要作用。瘦素（ｌｅｐｔｉ

8、ｎ）是一种由白脂肪种于细胞培养板上，置于３７℃、５％ＣＯ培养箱培２组织分泌的一种蛋白质激素，在调节奶牛能量代养４８ｈ。谢和乳腺中乳的合成方面起重要作用，在催乳素１．２试验设计存在的条件下，ｌｅｐｔｉｎ可促进奶牛乳腺中乳脂肪酸采用单因子完全随机试验设计，将培养４８ｈ的合成，以及上调α－酪蛋白