泌乳相关激素对乳酪蛋白在奶牛乳腺上皮细胞合成的影响及其调控机制

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1、‘分巧Ｉ学ＨＤ１Ｑ０９０；ＩＩ）（密级據叫义聲ＹＡＮＣｉＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博击学住冷文泌乳相关激素对乳酪蛋白在奶牛乳腺上皮细胞合成的影响及其调控机制田青王共荣泣芬扬州，２２５００９指巧教师姓名：教授，扬州大学，申请学位级别：博壬学科专业名称：动物营养与饲料科学２０１４．１０．１１．２４论文提交日期：论文答辩口期：２０１４学位授予单位１４．１２．３０：扬州大学学位授予日期：２０答辩委员会主席；朱伟云教授２０１４年１０月课题来源本论文研究受国家重点基础研究发展计划

2、（９７３计划）：激素和功能性氨基酸对乳中酪蛋白合成的调节作用（２１１ＣＢ１００８０３）的资助，本论文属于该课题的部分研究。Ｔｈｉｓ迅化ｅｒｔａｔｉｏｎｗａｓａａｒｔｏｆ化ｅｆｔｍｄｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｊｅｃｔｗｈｉｃｈｓｐｏｎｓｏｒｅｄｂＮａｔｉｏｎａｌＫｅｐｙｙＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐ＂ａｎ巧７３）口。ＣＢ１００８０３）．＇Ｈ：．ＩＩ靑泌乳相关激素对乳酪化白化奶中乳聰Ｊ皮细胞合成的拔响及巧调控机制中文摘要牛奶质量安全己成为制约我国奶业健康发展的首要问题

3、。乳蛋白是构成牛奶营养品质的主要物质基础，，它既渉及乳品质量安全又是奶业核必竞争力的标志。目前我国牛奶中現蛋白的含量普遍偏低（平均为２．８％），不仅达不到奶牛的遗传潜力，甚至低于国家标准（２．９５％）。因此，立足我国现实的饲料资源，簡明内源泌乳激素对乳蛋白合成与调控的机理，建立通过内源激素调控改善牛奶品质的理论和方法，己经成为奶业持续健康发展的重要需求。本研究膜岛素、催乳素和氨化可的松为研究对象，Ｗ酶消化法培养得到的奶牛乳腺上皮细胞系为载体分别研究了膀岛素、催郭素和氨化可的松对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响。一试验、选择在扬

4、州大学农牧场饲养的健康泌乳期荷斯坦奶牛，活体无菌采取乳腺組织，Ｗ酶消化法分离、培养、纯化奶牛乳腺上皮细胞，研究奶牛乳腺上皮细胞的体外培养效果。结果表明：ＷＤＭＥＭ／Ｆ１２为基础培养液，在培养液中添加１０％的胎牛血清、３００Ｉｌｉ／ｍＬ的双抗、２５ｕ／ｍＬ两性霉素Ｂ、ＩＴＳ、氨ｇ、表皮生长因子化可的松、催郭素等组成的完全培养液中奶牛乳腺上皮细胞生长良好。上皮细胞显微结构显示８代Ｗ内，大多数奶牛乳腺上，细胞么间连接成片皮细胞在体外培养过程中呈卵圆形和多角形，且细胞界限明显。萊光免疫细胞染色分析结果表明分离培养的現腺上皮细胞几乎全部呈阳性，四

5、种酪蛋白基因ＰＣＲ电泳产物结果清晰可见，这证实酶消化法得到的细胞是乳腺上皮来源，且具有正常生理功能，证明本试验成功建立了奶牛乳腺上皮细胞系。试验二、前期建立的奶牛乳腺上皮细胞系为基础，分别采用单因素５水平试验设计研究了在培养液中添加不同浓度的催乳素（０、５、５０、５００、５０００ｎｇ／ｍＬ）、族岛素（０、５、５０、５００、５０００ｎｇ／ｍＬ）和氨化可的松（０、１、１０、１００、１０００ｎｇ／ｍＬ）对奶牛乳腺上皮细胞生长、细胞信号通路相关基因表达、乳蛋白合成相关激素受体基因表达和酪蛋白－。Ｓ相对含量的影响结果表明：①催乳素能

6、显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖、促进ＰＲＬＲ－Ｐ＜０基因表达、促进Ｋ酪蛋白和总酪蛋白的分泌（．０５）５０ｎｍＬ之，随；在ｇ／前着添加量Ｓ－ＰＲＬＲ基因表达量Ｋ－的增加，、ＣＳ肥基因的表达量，酪蛋白和总酪蛋白的相对含量也随ＰＲＬ－。之增加，之后随着添加量的增加，其表达量和相对含量反而下降②５５００ｎｇ／ｍＬ的膜岛素能显著促进奶牛乳腺上皮细胞增殖５－５０００ｎｇｍＬ的膜岛素；／均能显著促进奶牛乳Ｋ－５０腺上皮细胞酪蛋白和总酪蛋白的分泌，ｎｇ／ｍＬ的膜岛素还能显著促进巧Ｎ３基因的表达；在５０ｎｇ／ｍＬ之前，随着膜岛素添加量的增加

7、，ＩＮＳＲ基因的表达量也随之增加，之后ｎ扬州大学博±学位论文随着膜岛素添加量的增加，其表达量反而下降。⑨２仙之前，氨化可的松对奶牛乳腺上皮细胞的增殖无影响，２化之后１０００ｎｇ／ｍＬ的氨化可的松显著抑制了奶牛乳腺上皮细胞的－ｍＬ增殖１１００ｎＣＳＮ３基１ｎｍＬ；ｇ／的氨化可的松显著增加了奶牛乳腺上皮细胞因表出ｇ／３Ｃ１－１０血的氨化可的松显著増加了奶牛乳腺上皮细胞中Ｋ显著増加了ＮＲ１基因表达，ｎｇ／－酪蛋白和总酪蛋白的相对含量。、Ｗ试验二（单因素试验试验Ｈ）所得到的膜岛素、傕乳素和氨化可的松的最佳作用４３剂量为基础

8、，Ｗ前期冻存的奶牛乳腺上