genistein对livin基因表达和恶性黑素瘤libr细胞凋亡、周期及增殖影响的实验研究

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1、分类号：R75单位代码：10752密级：公开学号：2009209宁夏医科大学硕士研究生学位论文Genistein对Livin基因表达和恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖影响的实验研究EffectsofGenisteinonexpressionoflivinandApoptosis,CycleandProliferationinhumanmalignantmelanomaLiBrcells学位申请人：杨一飞指导教师：王昊申请学位门类级别：医学专业名称：皮肤病与性病学研究方向：恶性黑素瘤的基因治疗所在学院：临床医学院论文完成日期：二〇一二年四月宁夏医科大学研究生

2、院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeEffectsofGenisteinonexpressionoflivinandApoptosis,CycleandProliferationinhumanmalignantmelanomaLiBrcellsStudent’sName:YangYifeiSupervisor：WangHaoSubjectCategory:MedicalScienceMajor:DermatologyandVenereologySpecialty:Genethe

3、rapyofmalignantmelanomaSchool:NingxiaMedicalUniversityCompletionDate:Apr.2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论

4、文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要Genistein对Livin基因表达和恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖影响的实验研究摘要目的阐明Genistein对恶性黑素瘤LiB

5、r细胞Livin基因表达的影响和对恶性黑素瘤细胞凋亡、周期及增殖的作用，为进一步探索Genistein治疗恶性黑素瘤的可能性和揭示Genistein的抑癌机制提供实验依据。方法分别在基因和蛋白水平上应用RT-PCR和Westernblot检测、确认恶性黑素瘤LiBr细胞Livin基因的表达；在体外以高表达Livin基因的恶性黑素瘤LiBr细胞为试验对象，应用RT-PCR检测Genistein作用LiBr细胞后Livin基因的表达变化，并初步探讨其剂量及时间效应；取最适浓度的Genistein作用LiBr细胞后应用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测

6、其对细胞凋亡的影响；应用PI单染流式细胞术分析其对细胞周期的改变；应用Westernblot检测其对凋亡效应蛋白caspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用。结果经RT-PCR和Westernblot检测，恶性黑素瘤LiBr细胞高表达Livin基因；Genistein作用LiBr细胞后能显著下调Livin基因表达，并且下调过程呈剂量和时间依赖关系，40umol/L可达到最大下调效应，其下调LivinmRNA的最大效应出现在作用后96h；Genistein可显著诱导LiBr细胞凋亡，增加LiBr细胞早、晚期凋亡率，引起细胞G0/G1期阻滞，

7、并能显著下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖。结论Genistein能显著下调恶性黑素瘤细胞Livin基因表达，并可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖。关键词Genistein，恶性黑素瘤，Livin，细胞凋亡，细胞周期，细胞增殖I宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要EffectsofGenisteinonexpressionoflivinandApoptosis,CycleandProliferationinhumanmalignantmelanomaLiBrcellsAbstractObjectiveClarifyGenis

8、teinonthecel