cpg odn增强树突状细胞对胃癌细胞增殖周期和凋亡影响的实验研究

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1、CpGODN增强树突状细胞对胃癌细胞增殖周期和凋亡影响的实验研究　　作者：孙梯业　颜伟　刘全达　张娜　贾洪琳　段伟宏　周宁新　作者单位：100088　北京，第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所(孙梯业、刘全达、贾洪琳、段伟宏、周宁新);空军总医院医务部(颜伟、张娜)　　【摘要】目的探讨CpGODN1826增强树突状细胞(DC)抗胃癌效应的作用。方法分离正常人外周血DC，用GM-CSF和IL-4培养，于第5天加入TNF-α并分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组继续培养。第6天各组均加入胃癌细胞冻融抗原50μl，Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ组再分别加入CpGODN182610μg/ml，第10天ELISA检测I

2、L-12和IFN-γ的水平，MTT法检测CTL对MKN45、MKN28、SGC7901和A549细胞的体外杀伤效应。流式细胞术检测CpGODN1826增强DC对胃癌细胞增殖周期、凋亡的影响。结果　体外培养第10天，加入CpGODN1826后各组IL-12、IFN-γ的分泌量明显提高;CpGODN1826协助DC对同种不同分化类型的胃癌细胞株MKN45、MKN28、SGC7901均有强烈的杀伤效应(P<0.01)，杀伤活性显著高于A549(P<0.01)。体外应用CpGODN1826对肿瘤细胞周期比例：G0/G1间期(MKN4568.35%、MKN2869.23%、SGC790169.80

3、%)，S期(MKN4539.45%、MKN2839.75%、SGC790139.55%)，G2/M期(MKN456.50%、MKN286.30%、SGC79016.42%);与A549(G0/G1间期57.68%，S期25.13%，G2/M期18.46%)比较，差异有统计学意义(P<0.01);同时，不同肿瘤细胞株的凋亡率分别为MKN4575.20%、MKN2373.87%、SGC790172.43%、A54951.43%，表明CpGODN1826能显著增强DC对胃癌细胞周期的抑制作用，促进胃癌细胞的早期凋亡(P<0.01)。结论　CpGODN1826体外可显著增强DC诱导出高效而特异的

4、抗胃癌效应，显著抑制胃癌细胞分裂增殖、促进凋亡，可作为胃癌免疫治疗的一种有效方法。　　【关键词】胃肿瘤;　树突细胞;　细胞周期;　细胞凋亡;　CpGODN　　【Abstract】　Objective　ToexplorewhetherCpGODN1826assistdendriticcells(DC)toaffecttheanti-gastriccancereffectsinvitro.Methods　DCwasisolatedfromnormalhumanperipheralbloodbyGM-CSF+IL-4，andappendTNF-αinthefifthanddividedⅠ，Ⅱ，

5、Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ，Ⅶ，Ⅷgroups，andappendcarcinomaantigen50μlineverygroup，CpGODN182610μg/mlinⅡ，Ⅴ，Ⅵ，Ⅷgroupsinthesixthday.IL-12andIFN-γlevelsweredetectedusingELISAin10thday.ThecytotoxicityofCTLtoMKN45，MKN28，SGC7901，A549wasdetectedbyMTTassayinvitro.TheinhibitiveeffectsofCpGODN1826ongastriccellproliferationcyclean

6、dapoptosisinvitroweredetectedbyflowcytometry.Results　Onthe10thday，IL-12，IFN-γlevelweresignificantlyincreasedintheCpGODN1826groups.TheCTLhadmuchobviouslyraisedthecytotoxicitytodifferentdifferentiatedtypesofthethreegastriccancercelllinessuchMKN45，MKN28，SGC7901byCpGODN1826，andthanA549(P<0.01).Treate

7、dwiththeCpGODN1826invitro，thepercentagesofG0/G1，SandG2/Mcellsoftumorcellswere(MKN4568.35%，MKN2869.23%，SGC790169.80%)，(MKN4539.45%，MKN2839.75%，SGC790139.55%)and(MKN456.50%，MKN286.30%，SGC79016.42%)respectively.andtheapop