替尼泊甙对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响

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1、替尼泊甙对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响【关键词】替尼泊甙；胃癌；凋亡；细胞周期基金项目：河南省科技攻关资助项目(0424410087)　　EffectsofTeniposideonCellCyclePhaseandApoptosisofGastricCarcinomaCellLines　　Abstract：ObjectiveToidentifytheactionmechanismofteniposideongastriccarcinomacelllineBGC823.MethodsThesuppressiv

2、erateofcellgroinedbyMTTassay,thedevelopmentofcellcycleandapoptosisinducedbyteniposideinedbyfloetry.ResultsMTTassayshoetry,sometypicalsubdiploidpeakse,thecellcycleofG2/Mphaseacelllinesinvitro.ApoptosisinducedbyVM26ajormechanismsofVM26.Theinfluenceofthedist

3、ributionofcellcyclephasea;Apoptosis;Cellcyclephase　　0引言　　基础研究表明，替尼泊甙（VM26）对细胞DNA的作用是同类药物依托泊甙（VP16）的8~10倍，但VM26在消化系统肿瘤的治疗上应用较少，本实验通过多种实验方法，观察了VM26对胃癌细胞的体外抗瘤活性和诱导细胞凋亡的能力，探讨其在胃肠肿瘤上应用价值。　　1材料与方法　　1.1材料　　1．1.1细胞株人胃癌细胞BGC823，河南省医学研究所惠赠。　　1．1.2药物及试剂替尼泊甙为美国百时美

4、施贵宝公司产品（批号：6G14423），1640培养基（GIBCO公司产品），标准胎牛血清（天津TBD血液研究所产品），鼠抗人p53单克隆抗体(迈新试剂公司)，即用型SP免疫组化试剂盒和浓缩型DAB显色试剂盒为美国Sigma公司产品。　　1.2方法　　1.2．1细胞形态学观察倒置显微镜下观察不同时间段的细胞生长情况。并取不同时间段的细胞涂片固定，免疫组化染色，观察细胞凋亡相关蛋白p53表达变化。　　1.2．2MTT法测定不同浓度下细胞生长抑制率的变化取对数生长期的细胞，接种于96孔板，孵育48h后，酶联免疫检

5、测仪在570nm波长测每孔的吸光值（OD）、按下列公式计算细胞生长抑制率：细胞生长抑制率（%）=（1实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%。每组重复5次。　　1.2．3细胞凋亡率和细胞周期检测本次仅选较小的药物浓度组作流式细胞仪检测，每浓度取4个时间段，即药物作用后0、12、24、48h。按实验设计处理细胞，处理完毕后，用70%的冷乙醇固定。采用碘化丙锭（PI）一步插入性DNA定量荧光染色法，检测细胞周期和细胞凋亡率。　　1.3统计学处理实验数据采用SSPS10.0统计软件包处理，计量资料采用正态性

6、检验，方差齐性检验，均数间的两两比较采用LSD方法；率的比较采用χ2检验，单样本t检验，以α=0.05为检验水准。　　2．2细胞凋亡相关蛋白p53表达的影响结果显示，凋亡相关基因p53的蛋白阳性表达产物位于细胞的细胞核内，呈棕色颗粒。VM26作用48h后，实验组p53的蛋白表达的阳性率（0.7260±0.067）明显高于对照组（0.5035±0.017），见图3、4，两者之间的差异有统计学意义（P=0.024）。　　2．3VM26作用后细胞生长抑制率的变化在一定浓度范围内，细胞生长抑制率随着浓度的增加而逐

7、渐增加，见表1。　　表1VM26作用后细胞生长抑制率的变化（略）　　2．4VM26作用后细胞周期分布VM26处理细胞后，细胞周期分布图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。随着作用时间的延长，凋亡峰逐渐增高，见图5。　　2．5VM26对细胞周期和凋亡率的影响随时间的延长，G2/M细胞逐渐增加，48h达到最高，与0h相比差异有统计学意义（P=0.000）。G1/G0期、S期的细胞变化也有差异，在48h时表现出G1/G0期、S期的显著减少。细胞的凋亡率也随时间的延长而增加。24、48h细胞的凋亡率与0h比较，差异有

8、统计学意义（P=0.000），12h的凋亡率与0h比较，差异无统计学意义（P=0.119），见表2。　　图5VM26对BGC823作用不同时间细胞周期分布图（略）　　表2VM26对BGC823细胞周期分布和凋亡的影响（略）　　　　3讨论　　本实验结果显示在不同浓度的VM26作用下，细胞生长抑制率随着浓度的增加而增加。随着时间的延长，G2/M期的细胞显著增多，表现出G2/M期的强力阻断作用，