sirna沉默livin基因对恶性黑素瘤libr细胞凋亡、周期及增殖的影响

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1、siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响：王昊，谭升顺，王新阳，刘栋华，于春水，白转丽【摘要】　　目的：观察沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡和周期及增值的影响.方法：采用siRNA3转染人恶性黑素瘤LiBr细胞后分别应用TUNEL法和AnnexinVFITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响，应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变，应用免疫荧光细胞化学技术检测siRNA对凋亡效应蛋白Caspase3表达的影响及应用MTT法检测siRNA对细胞增殖的作用.结果：siRNA3转染LiBr细胞72h可诱

2、导细胞凋亡(P<0.05)和引起细胞G0/G1期阻滞(P<0.05)；可下调Caspase3蛋白表达(P<0.05)及抑制细胞增殖(P<0.05).结论：Livin可做为应用RNA干扰技术探索恶性黑素瘤基因治疗的潜在靶基因.【关键词】livin；黑色素瘤；RNA干扰；细胞凋亡；细胞周期；细胞增殖　【Abstract】AIM:ToinvestigateallinterferingRNA(siRNA)leadstoinductionofapoptosis,arrestofcellcycleandinhibitionofproliferatio

3、ninmalignantmelanomaLiBrcells.METHODS:AchemicallysynthesizedsiRNAduplextargetingtolivin,anmalignantmelanomaLiBrcells.ThenTUNELassayandAnnexinVFITC/PIfloetricanalysisedforapoptosis,PIfloetricanalysisforcellcycle,immunofluorescenceanalysisforCaspase3proteinexpression,andMTTassayforcel

4、lproliferation.RESULTS:SilencinglivingenebysiRNAcouldinduceapoptosis(P<0.05)andupregulatecaspase3obviously(P<0.05),arrestcellcycleatG0/G1phasesignificantly(P<0.05),andinhibitcellproliferationremarkably(P<0.05).CONCLUSION:Livincanserveasapotentialmoleculartargettomalignant

5、melanomaingenetherapybysiRNA.【Keyelanoma;RNAinterferenc;apoptosis;cellcycle;cellproliferation　　0引言恶性黑素瘤（malignantmelanoma,MM）近年来在世界范围内的发病率明显上升,因其高度恶性、易转移且对化学及放射疗法不敏感，致患者5a生存率不到10％.livin是近年来发现的凋亡蛋白抑制因子（inhibitorofapoptosisprotein,IAP）家族的最新成员，其在多数恶性肿瘤细胞中高表达而在正常细胞中不、或低表达的特点开始引起研究人员的关注［1］

6、.RNA干扰（RNAinterence,RNAi）现象的发现及小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)在哺乳动物细胞产生RNA干扰效应的技术建立为肿瘤基因治疗探索在方法上开辟了新的途径［2］.我们以化学合成的siRNA3序列沉默livin基因后观察其对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响，为探索恶性黑素瘤的基因治疗提供实验依据.1材料和方法1.1材料恶性黑素瘤细胞株LiBr由第四军医大学西京医院皮肤科高天文教授惠赠；DMEM培养基、胎牛血清（FBS）购自Gibco公司；siRNA–3为前期研究中从设计的靶向livin（GenBa

7、nkAccessionNo.NM_022161）的3条序列中确定的敲低效应最佳的干扰序列（sense5′GAGAGGUCCAGUCUGAAAGdTdT3′,antisense5′CUUUCAGACUGGACCUCUCdTdT3′，与livinmRNA特异结合位点：790808），siRNANC为与人类基因组序列无任何匹配的阴性对照序列（sense5′UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT3′,antisense5′ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT3′），由中国上海GenePharma公司化学合成并退火形成双链（siRNAd

8、uplex