wisp39基因对u937细胞增殖、凋亡和周期的影响

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1、WISp39基因对U937细胞增殖、凋亡和周期的影响作者：李玥莹，刘黎琼，杨晶，刘伟，陈祥俊，李小青，杜雯，黄士昂【摘要】为了探讨一种新发现的p21调控蛋白WISp39对白血病细胞的增殖、凋亡和周期的影响，构建了WISp39的真核表达质粒pLenti6/V5WISp39，并导入了人髓系白血病细胞系U937细胞，转染后用定量PCR检测了WISp39表达的变化，用CCK8法测定细胞增殖活性，流式细胞术（FACS）检测细胞凋亡和周期的变化。结果显示：pLenti6/V5WISp39转染48小时后，实验组中WISp39mRNA表达上升了（5.5±1.2）倍，同时U937细

2、胞的增殖明显受到抑制，抑制率为37.6％；进一步的分析表明，在实验时间内，WISp39表达的升高不能明显诱导U937细胞的凋亡，但G0/G1期细胞比例由(40.59±0.7)％上升到(49.79±1.1)％。结论：WISp39对于U937无明显的诱导凋亡作用，但通过对细胞周期的影响，使停滞在G0/G1期的细胞增多，从而抑制了U937增殖。【关键词】细胞增殖EffectofWISp39onProliferation，CellCycleandApoptosis13ofU937CellsAbstractToinvestigatetheeffectofanovelp21mod

3、ulatingproteinWISp39onproliferation,apoptosisandcellcycleofleukemiacells,theplasmidpLenti6/V5WISp39wasconstructedandtransfectedintothehumanmyelocyticleukemiacellline—U937cells.TheexpressionofWISp39wasdetectedbyrealtimePCRat48hoursaftertransfection,proliferationofU937cellsassayedbyCCK8

4、,apoptosisandcellcycleweredeterminedbyflowcytometry.TheresultsshowedthatplasmidpLenti6/V5WISp39couldreadilyenhancetheexpressionofWISp39inU937cells.Asignificantgrowthinhibition(37.6％)wasobservedincellstranfectedwithpLenti6/V5WISp39,whilethecontrolplasmidpLenti6/V5lacZshowedlittleeffect

5、onU937growth.FurtheranalysisrevealedthatpLenti6/V5WISp39didnotshowobviousapoptosisinductioneffect,butitcouldreallyregulateU937proliferationviacellcyclemodulation.ComparedwithpLenti6/V5lacZ,pLenti6/V5WISp39resultedinincreaseofcellsinG0/G1phaseby10%at48hoursaftertransfection.Itisconclud

6、edthattheWISp39genehasnosignificantapoptosisinductioneffectonleukemiccells,butitcanincreasecellsatG0/G1phaseviaeffectoncellcycle,13thusinhibitingtheU937proliferation.ThisresultmeansWISp39genecanactasanegativemodulatorontumourcells.细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)抑制因子p21CIP1/WAF1，属于CDK抑制物的Cip/Kip家族，是一个调控

7、细胞周期与凋亡平衡的结点分子。p21CIP1/WAF1基因编码的蛋白主要抑制cyclin/CDK2复合物和负调节细胞周期进行，还可以结合增殖性细胞核抗原（PCNA）阻碍DNA合成。它与CKD2等因子结合并抑制其活性，使损伤的细胞停滞于G1期,抑制DNA复制和有丝分裂,从而使受损的细胞有充分的时间修复,不能修复的则发生凋亡。除了对细胞周期的调控作用，p21还参与了细胞进程中的分化、衰老和凋亡。它参与细胞的多种功能活动，与肿瘤发生、发展有关，在肿瘤细胞生物学中的地位令人瞩目。最近发现一种新的p21调控蛋白—WISp39,它是一种三十四肽重复单