氧化应激对RPE细胞αB-晶状体蛋白表达的影响

《氧化应激对RPE细胞αB-晶状体蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10286分类号：R77密级：公开UDC：617学号：152998氧化应激对RPE细胞αB-晶状体蛋白表达的影响研究生姓名：栾洁导师姓名：刘欢申请学位类别医学硕士学位授予单位东南大学一级学科名称眼科学论文答辩日期2018年05月29日研究方向新生血管性眼病学位授予日期2018年06月20日答辩委员会主席刘庆淮评阅人盲审2018年06月04日硕士学位论文氧化应激对RPE细胞αB-晶状体蛋白表达的影响专业名称：眼科学研究生姓名：刘欢导师姓名：栾洁本论文获南京市医学科技发展基金项目（799000003

2、8）资助。EFFECTOFOXIDATIVESTRESSONTHEEXPRESSIONOFΑB-CRYSTALLININRPECELLSAThesisSubmittedtotheGraduateFacultyFortheDegreeofMasterofMedicineMajorinOphthalmologyInDepartmentofOphthalmologySoutheastUniversityNanjing,JiangsuProvince,ChinaApril,2018东南大学学位论文独创性声明本人声

3、明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股份有限公司有权保留本人所送交学位

4、论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。研究生签名：导师签名：日期：摘要摘要目的探讨氧化应激对视网膜色素上皮（retinalpigmentepithelial,RPE）细胞αB-晶状体蛋白（CRYAB）表达的影响。方法（1）用不同浓度的H2O2处理RPE细胞

5、，用MTT方法检测细胞活性，选出对细胞存活率影响无统计学差异的H2O2处理条件，将RPE细胞按照H2O2处理时间分组：1h组、3h组、6h组；每组各用不同浓度H2O（空白对照、2100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L）处理。用WesternBlot、RT-PCR法分别检测RPE细胞CRYAB的蛋白及基因表达。（2）用荧光标记的阴性siRNA和lipofectamin2000试剂按照不同浓度比例转染RPE细胞，选出最优转染条件进行后续实验。设计3条CRYAB的干扰RNA，选出沉默效果最佳

6、者。（3）设置siRNA组、siRNA+H2O2组、阴性siRNA对照组（NC组）、H2O2组、空白对照组；转染时间为24h，200μmol/L的H2O2处理6h；用RT-PCR、WesternBlot法分别检测RPE细胞CRYAB的基因及蛋白表达。结果（1）1h组H2O2浓度在100μmol/L时CRYAB的基因表达增加趋势明显（P<0.05），但CRYAB的蛋白增加并不明显（P>0.05）；在1h组（H2O2浓度为200μmol/L、300μmol/L时）、3h组和6h组，随着H2O2浓度增加CRYA

7、B的基因与蛋白表达都有明显增加，且差异有统计学意义（P<0.05）；在相同浓度H2O2刺激下CRYAB的基因和蛋白表达量随时间延长而增高，且差异有统计学意义（P<0.05）。（2）siRNA与Lipofectamine2000的比例在1:0.019，且siRNA浓度在105nM时转染效果最佳。（3）H2O2组与空白对照组、siRNA+H2O2组相比CRYAB的基因与蛋白表达均增高，差异有统计学意义（P<0.05）；siRNA组与siRNA+H2O2组、空白对照组相比CRYAB的基因与蛋白表达均降低，差异有

8、统计学意义（P<0.05）。结论（1）RPE细胞CRYAB的表达呈H2O2剂量依赖性和时间依赖性；（2）设计的SiRNA-CRYAB-464能有效沉默RPE细胞CRYAB基因；（3）RPE细胞CRYAB基因沉默后，有效减少低剂量短时间（200μmol/LH2O2，6h）的氧化刺激后RPE细胞CRYAB的基因和蛋白的高表达。关键词：αB-晶状体蛋白；视网膜色素上皮细胞；氧化损伤；过氧化氢；siRNAIAbstractAbstra