氧化应激对人晶状体上皮细胞中SMP30蛋白表达变化的影响.pdf

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1、201420134氧化应激对人晶状体上皮细胞中SMP30蛋白表达变化的影响李舒凝导师姓名：谭少健专业名称：眼科学申请学位类型：学术型学位答辩委员会主席：黄敏丽答辩委员会委员：周卫为黎海平梁勇何剑峰二○一六年五月个人简历基本情况姓名：李舒凝性别：女民族：汉族出生年月：1990.08籍贯：江苏新沂政治面貌：中共党员学习工作经历起止时间所在院校或单位学历学位职称2009.09-2014.07桂林医学院学士无2014.09-2017.07广西医科大学硕士无研究生期间科研经历项目起止时间：2015.03-2016.08项目名称：高钙及氧化应激时衰老标记蛋白30对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的保

2、护作用项目来源：国家自然科学基金本人承担任务：细胞培养、样本检测、数据收集与分析目录一、缩略语表……………………………………………………………………1二、中文摘要……………………………………………………………………2三、英文摘要……………………………………………………………………4四、前言…………………………………………………………………………6五、论文正文……………………………………………………………………81、材料和方法………………………………………………………………82、结果………………………………………………………………………193、讨论…………………………………………………………

3、……………224、结论………………………………………………………………………265、参考文献…………………………………………………………………276、附录………………………………………………………………………33六、综述………………………………………………………………………391、正文………………………………………………………………………392、参考文献…………………………………………………………………43七、致谢………………………………………………………………………48八、攻读学位期间发表的学术论文…………………………………………49氧化应激对人晶状体上皮细胞中SMP30蛋白表达变化的影

4、响2017届硕士毕业论文缩略语表英文缩写英文全称中文全称HLECsHumanLensEpithelialCells人晶状体上皮细胞SMP30SenescenceMarkerProtein-30衰老标记蛋白-30ROSReactiveOxygenSpecies活性氧自由基RNSReactiveNitrogenSpecies活性氮自由基DMSODimethylSulphoxide二甲基亚砜DEPCDiethyPyrocarbonate焦碳酸二乙酯PVDFPolyvinylideneFluoride聚偏二氟乙烯ARCAge-relatedCataract年龄相关性白内障1氧化应激对人晶状体上皮细

5、胞中SMP30蛋白表达变化的影响2017届硕士毕业论文氧化应激对人晶状体上皮细胞中SMP30蛋白表达变化的影响摘要目的：观察氧化应激对人晶状体上皮细胞（humanlensepithelialcells,HLECs）中衰老标记蛋白30（SenescenceMarkerProtein30,SMP30）表达变化的影响，为今后研究其在人晶状体上皮细胞及白内障发生发展过程中的作用奠定基础。方法：用不同浓度过氧化氢（0、100、200、300μM）刺激人晶状体上皮细胞24小时，建立不同浓度急性氧化应激模型，通过光镜、MTT检测分析细胞形态、状态，Westernblot检测SMP30蛋白的表达情况。用不

6、同浓度过氧化氢（0、25、50、75、100、125、150μM）刺激人晶状体上皮细胞2周，建立慢性氧化应激模型，诱导细胞衰老，通过光镜、MTT、β-半乳糖苷酶衰老细胞染色、细胞周期检测细胞氧化应激情况及评估细胞状态，用q-PCR、Westernblot检测SMP30基因及蛋白的表达变化。结果：过氧化氢刺激HLECs24小时，随着过氧化氢浓度的增高，各处理组细胞在光镜下可见密度逐渐下降，变大变圆，300μM处理组细胞破碎，MTT结果提示细胞生存率逐渐降低，各浓度处理组与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05），SMP30在100、200μM处理组的蛋白表达量均较对照组升高（P均<0.0

7、5）。过氧化氢刺激HLECs14天后25μM处理组细胞形态与对照组无明显差异，50-125μM处理组细胞密度逐渐下降，细胞呈衰老状态，150μM处理组细胞碎裂。MTT结果提示25-50μM处理组较对照组相比生长曲线逐渐下移，75μM处理组仅维持细胞基本代谢活性，100-150μM处理组生长曲线则在早期大幅下降并维持。β-半乳糖苷酶衰老细胞染色显示随过氧化氢浓度升高，衰老阳性细胞增多，75-150μM处理组阳性细胞较2氧化