bfgf对人晶状体上皮细胞中fak表达的影响

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1、bFGF对人晶状体上皮细胞中FAK表达的影响.L.编辑。作者：王欣玲　于韬　张国刚　阎启昌　张劲松【摘要】　　目的：观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgroRNA水平的动态变化。方法：体外培养的第3代人晶状体上皮细胞，建立细胞划痕损伤模型，经0，5，10，15μg/LbFGF作用8~16h后，电脑图像法测定细胞迁移距离，RT-PCR法检测0，1，4，8，16hFAKmRNA水平，免疫荧光法检测整合素β1和增殖细胞核抗原表达阳性率的变化。结果：与对照组比，5μg/L组细胞迁移距离和FAKmRNA表达显著增

2、加（P<0.05）；10μg/L组细胞整合素β1表达阳性率显著增加（P<0.05）；15μg/L细胞迁移距离和FAKmRNA显著降低（P<0.05）。结论：bFGF引起人晶状体上皮细胞迁移距离和FAKmRNA表达的变化。　【关键词】碱性成纤维细胞生长因子　上皮细胞　晶状体　黏着斑激酶　迁移　　EffectofbFGFonexpressionfocaladhesionkinaseinhumanlensepithelialcellsAbstractAIM:Toobservetheeffectsofdifferentcon

3、centrationbasicfibroblastgroanlensepithelialcellsmigrationandthedynamicchangesinfocaladhesionkinase(FAK)mRNAlevel.METHODS:Thescratchodelofthethirdpassagehumanlensepithelialcellsagesofcellmigrationeasuredusingaputer-assistedvideomicroscopicsystem.ThemRNAlevelofFAKeasured

4、erasechainreaction(RT-PCR)assayat0,1,4,8and16hour.Thepositiveexpressionofintegrinβ1andproliferatingcellnuclearantigen(PA)munofluorescentstaining.RESULTS:ThecellmigrationandFAKmRNAlevelulatedigrationandFAKmRNAleveligrationdistanceandFAKmRNAexpressionvariesportantroleinhu

5、manlensepithelialcellsmigration.·KEYethylrhodamineisothiocyanate，TRITC）标记的山羊抗家兔IgG和异硫氰基荧光素（fluorescEinisothiocyanate，FITC）标记的山羊抗小鼠IgG购自美国SantaCruz公司。使用的仪器包括OlympusBX51型荧光显微镜、OlympusCK40型倒置显微镜及数码摄影系统，PerkinElmerPCR扩增仪，岛津UV-240紫外-可见分光光度计和Amershampharmacia凝胶成像系统等。1.2方法人晶状体

6、组织来自中国医科大学眼科中心。取人晶状体前囊膜，组织块法细胞培养。取第3次传代细胞，建立细胞划痕损伤模型[1]。在培养的细胞中每瓶加入含10ml/L胎牛血清的培养液抑制细胞分裂增殖，排除细胞增殖对细胞迁移的影响。细胞迁移图像经电脑图像处理系统定量。细胞迁移速度用划痕两侧迁移的距离表示。加入不同浓度的bFGF，使培养液中bFGF的终浓度依次为0，5，10和15μg/L，在37℃，50ml/LCO2中培养8和16h，分别记录实验数据。RT-PCR引物：FAK（5'-TGACAGGGAGGATGGAAGTC-3'，5'-TACTCTTGCT

7、GGAGGCTGGT-3'），GAPDH（5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'，5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3'）。分别在1，4，8，16h抽提细胞总RNA后作逆转录。然后用PCR扩增仪进行PCR反应。94℃5min，94℃1min，68℃1min，72℃1min，30个循环；最后72℃延伸10min，4℃结束反应。10g/L琼脂糖电泳，电泳结束后凝胶置凝胶成像系统中扫描图像入计算机中保存处理。第3代人晶状体上皮细胞培养16h后，PBS漂洗3次，每次5min，40g/L多聚甲醛固定30min后，PB

8、S再漂洗3次，每次5min，5mL/LTritonX-100漂洗3次，每次5min，100g/LBSA于4℃下封闭过夜。分别加1∶100(体积比)稀释一抗（整合素β1或PA抗体），37℃恒温孵育1h，5ml/LTrito