不同固定方式对骨折愈合中bfgf表达影响的实验研究

《不同固定方式对骨折愈合中bfgf表达影响的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、数个月；从修氨过程上看，大概分为四个主要阶段：血肿期、炎症反应期、原始骨痴反应和软骨形成期、软骨内成骨和骨塑形期。它需要一系列在空间和时间上来说都是高度关联的相互作用。骨折愈合的机制非常复杂，影响的因素也很多，但无论何种因素，最终必将通过分子问的作用，来完成骨折修复的调控。研究发现，这一过程离不开骨原性生长因子的调控。参与骨折修复的骨原性生长因子包括很多，如：碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）、转化生长因子一６（ＴＧＦ一１３）、血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）、白细胞介素（ＩＬ）、胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）、ｍ小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）等［３

2、，４，５］。近来研究表明ｂＦＧＦ具有强烈的促进细胞增殖作用，ｂＦＧＦ作为临床骨折修复的辅助药物，可能最具有潜力【６】。因此，本实验通过研究闭合复位石膏外固定及切开复位钢板内固定对胫骨骨折愈合过程中碱性成纤维细胞生长因子表达的影响，拟从生长因子的角度探讨两种治疗方法对骨折愈合的影响。材料与方法一、实验材料（一）、实验动物成年雄性新西兰大白兔１６只，体重３．０±０．３ｋｇ（南昌大学医学院动科部提供）。（二）、主要实验器材１．固定器械医用不锈钢钢板、螺钉（各种规格）：石膏绷带（均由南昌大学第一‘附属医院提供）。２．手术器械一套（由南昌大学第一附属医院及江西天诚公司提供）３．Ｌ

3、Ｘｌ２０型组织处理机（德国ＯＸＩＳ公司）４．ＲＭ２１３５型切片机（德国ＬＥＩＣＡ公司）５．恒温烤箱（上海医用仪器厂）６．温控微波炉（ＳＡＮＹＯ日本）７．Ｏｌｙｍｐｕｓ—ＢＨＴ显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）８．微量移液器（上海医用实验仪器厂）９．图像分析处理系统（日本ＪＶＣ公司）：包括（１）光源部分；（２）摄像部分；（３）计算机图像分析系统；（４）图像分析软件。（三）、主要药品及试剂１．氯胺酮２．苯巴比妥３．碘伏４．庆大霉素５．青霉素６．多聚甲醛７．伊红８．苏木精９．甘油明胶１０．乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）１１．磷酸ｊ氢钾１２．磷酸氢二钠１３．氢氧化钠１４．氯化钠１５．双

4、氧水１６．甲酸１７．甲醇１８．乙醇１９．多聚甲醛２０．９５％酒精、９０％酒精、８０％酒精、７０％酒精２１．二甲苯以下均由武汉博士德生物工程有限公司购得：１．Ｉ抗：０．１ｍｌ为兔抗兔、人、鼠ｂＦＧＦ多克隆抗体。２．正常山羊血清封闭液：１２ｍｌ，为二抗同种动物血清，用于组织切片的封闭。３．二抗：１２ｍｌ，亲和纯化抗体，标记长臂生物素山羊抗兔ＩｇＧ。４．ＳＡＢＣ：１２ｍｌ，链酶亲和素一过氧化物复合物。５．复合消化液：６ｍｌ，消化石蜡切片以暴露被遮蔽的抗原。６．抗原修复液：６ｍｌ，接在微波修复抗原之后，进一步增强某些指标染色。二、实验方法（一１、骨折模型的制作取１６只成年雄性

5、新西兰兔为研究对象，采取自身双侧对比的方法，制作双侧胫骨中段骨折模型，随机取一侧为实验侧，另一侧为对照侧，实验侧行钢板内固定，对照侧行手法复位，石膏外固定。以按１０ｍｇ／ｋｇ氯氨酮和Ｏ．１９苯巴比妥行腹腔注射麻醉，麻醉成功后，外力使兔子双侧胫骨骨折，随机取兔子一侧后肢从踝关节到膝关节脱毛，严格消毒、铺巾，在无菌条件下，取该侧后肢小腿外侧切口，沿胫骨纵行切开皮肤，于肌间隙进入，暴露胫骨骨折段，剥离骨膜，剥离约３ｃｍ长，选择合适钢板，行胫骨骨折内固定，位置良好，逐层缝念，包扎切口。手术结束完毕不予夕｝固定。另一侧兔子胫骨骨折行手法复位、石膏外固定，拍摄ｘ线片，位置良好后，将

6、兔子送回笼中同术前一样饲养。、（二）、动物的术届处理１．术后３天内每日注射８０万单位青霉素预防伤口感染，必要时给内圆定德伤口换药。若石膏外霆定缢出凝石膏松动，及时调整石膏位置。２．新西兰兔随机编号、分组情况及处死时基本资料见表１。分别于术后３天，７天，１４天，２ｌ天采用心内注射空气的方法分批处死新西兰兔。表ｌ动物分组处死一燕表处死时问（天）３新西兰兔编号１３、１４、１５、１６７９、ｌＯ、“、１２１４５、６、７、８２ｌ１、２、３、４（三）、免疫组化检查１。取材以胫骨骨折端为中心，骨折远近端各切取Ｏ．５ｃｍ长标本，将钢板内网定铡标本作为实验组，石膏外国

7、定德作为对照缝，生毽盐承渖洗于净，立郄置入４％多聚甲醛中固定１２小时。２．脱钙将标本置入１５％ＥＤＴＡ脱钙液中黢钙，以针枣ｌ法检测黢钙翟凌，针瓷ｌ无阻挡感，即为脱钙完全，然后流水冲洗过夜，沿胫骨中轴矢状面剖开，脱水、透弱、浸蜡、包埋，常规石鳍切片５１Ｊｍ，６５４Ｃ烤片３小时。然后进行常规ＨＥ染色和免疫组织化学染色。３．ＨＥ染色步骤：二甲苯Ｉ、ＩＩ脱蟮￥１５分钟无水酒精Ｉ、ＩＩ、９５％酒精、９０％淄精、８０％酒精、７０％酒精｛各２分镑流水冲洗｝２分钟苏木精｛２５分钟流东、押洗ｌ１分钟９０％酒精｛１分镑伊红；２分钟流水冲洗｛１分钟９５％潘精