tgfβ1基因转染对人晶状体上皮细胞周期调控的影响

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1、TGFβ1基因转染对人晶状体上皮细胞周期调控的影响【摘要】　　目的：探讨脂质体介导的TGFβ１基因（pEGFPTGFβ１）转染诱导人晶状体上皮细胞系B3(HLECB3)细胞周期蛋白激酶抑制因子p21及细胞周期蛋白激酶CDK2的表达及其对细胞周期调控的影响。方法：将pEGFPTGFβ１转染人晶状体上皮细胞系B3(HLECB3)，采用RTPCR和Westernblot方法检测pEGFPTGFβ１转染后24，48，72，96hp21，CDK2和Smad4mRNA和蛋白的表达，设立正常细胞组及pEGFPC2转染组为对照组。结果：pEGFPTGFβ1转染组T

2、GFβ124h开始升高，48h达到最高，72h略有减少，96h明显减少，但仍高于正常组，而空载体组与正常细胞组则无明显变化。p21变化趋势和TGFβ1相符，CDK2组变化趋势则正好相反，Smad4组48h明显升高，72h下降明显，96h基本恢复正常。结论:TGFβ1通过活化凋亡基因p21，降低细胞周期蛋白激酶CDK2。【关键词】晶状体上皮细胞；TGFβ1基因；转染；p21;CDK2;Smad4　　AbstractAIM:Toinvestigatethechangeofp21,CDK2andSmad4ontheHLECtransfectedwithpEGFPTGFβ1p

3、lasmidandtheeffectofTGFβ１genetransfectiononthecellcyclecontrolofhumanlensepithelialcell.METHODS:Immortalizedhumanlensepithelialcellline(HLECB3)wastransferedby11pEGFPTGFβ1gene.TheexpressionofTGFβ1mRNA,p21mRNA,CDK2mRNAandSmad4mRNAandproteininducedbytransferedbyTGFβ1geneweremeasuredbyRTPCR

4、andWesternblotatdifferenttimeperiods.RESULTS:RTPCRdetectedthatTGFβ1mRNAbegantoraiseafter24h,culminatedafter48h,decreasedafter72h,decreasedmuchafter96h,butstillmorethanthenormal.p21mRNAcompaniedwithit.butCDK2decreasedwithit.WesternblotdetectedthattheconsequenceconsistedwithRTPCR.Theeffecto

5、fTGFβ1genewasdemonstratedfromtheleveroftranscriptionandtranslation.Smad4proteinraisedwiththeleverofTGFβ1geneatvarioustimepoint,butdisappearedveryquickly.CONCLUSION:TGFβ1canincreasep21,butdecreaseCDK2,toimpactthecellcycleofHLEC.TGFβ/Smad4pathwaytakepartinthecourse.　　KEYWORDS:lensepithelialc

6、ells;TGFβ1;genestransfer;p21;CDK2；Smad4　　0　引言　　转化生长因子β(TGFβ11)可抑制上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞,以及某些肿瘤细胞的生长,并使这些细胞停滞在细胞周期的第一个间隔区：G1期，从而阻止细胞进入S期[1]。许多研究表明，高表达活性TGFβ1的转基因鼠和其体外培养鼠晶状体均出现晶状体混浊的症状[2,3]，我们的前期实验证明TGFβ1可抑制晶状体上皮细胞增殖，改变细胞周期，诱导其发生凋亡。目前已经发现TGFβ信号传导经典途径为:TGFβ配体与细胞膜受体结合,激活细胞内Smads蛋白,协同多种转录因子,最终导致目的基因

7、表达。Smads类蛋白是TGFβ信号转导通路中必不可少的中介蛋白，存在于胞质中[4]。Smad4是通用枢纽分子,与上游分子形成核转运复合物后,将信号由胞质传入核内,协同转录因子上调或下调靶基因的表达。Smad4由于其中枢作用而被认为是调控TGFβ信号通路的关键分子。我们通过基因转染技术对TGFβ1抑制人晶状体上皮细胞，导致白内障发生的具体作用机制进行探讨。　　1　材料和方法　　1.1　材料　　永生化细胞系HLECB3(中国医科大学眼科),HGDMEM培养液（