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《临床医学毕业论文tgfβ1基因转染对人晶状体上皮细胞周期调控的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文基因转染对人晶状体上皮细胞周期调控的影响2014年6月25日TGFpi基因转染对人晶状体上皮细胞周期调控的影响【摘要】H的：探讨脂质体介导的TGF卩1基因(pEGFPTGF卩1)转染诱导人晶状体丄皮细胞系B3(HLECB3)细胞周期蛋白激酶抑制因子p21及细胞周期蛋白激酶CDK2的表达及其对细胞周期调控的影响。方法：将pEGFPTGF卩1转染人晶状体上皮细胞系B3(HLECB3),采用RTPCR和Westernblot方法检测pEGFPTGF卩1转染后24,48,72,96hp21,CDK2和Smad4mR
2、NA和蛋白的表达，设立正常细胞组及pEGFPC2转染组为对照组。结果：pEGFPTGFpi转染组TGFpi24h开始升高，48h达到最高，72h略有减少，96h明显减少，但仍高于正常组，而空载体组与正常细胞组则无明显变化。p21变化趋势和TGFpi相符，CDK2组变化趋势则正好相反，Smad4组48h明显升高，72h下降明显，96h基木恢复正常。结论:TGF卩1通过活化凋亡基因p21,降低细胞周期蛋白激酶CDK20【关键词】晶状体上皮细胞；TGF卩1基因；转染；p21;CDK2;Smad4AbstractAIM:Toinv
3、estigatethechangeofp21,CDK2andSmad4ontheHLECtransfectedwithpEGFPTGF卩1plasmidandtheeffectofTGF卩1genetransfectiononthecellcyclecontrolofhumanlensepithelialcell.METHODS:Immortalizedhumanlensepithelialcellline(HLECB3)wastransferee!bypEGFPTGF卩1gene.TheexpressionofTGFp1
4、mRNA,p21mRNA,CDK2mRNAandSmad4mRNAandproteininducedbytransferedbyTGF卩1geneweremeasuredbyRTPCRandWesternblotatdifferenttimeperiods.RESULTS:RTPCRdetectedthatTGF卩1mRNAbegantoraiseafter24h,culminatedafter48h,decreasedafter72h,decreasedmuchafter96h,butstillmorethantheno
5、rmal.p21mRNAcompaniedwithit.butCDK2decreasedwithit.WesternblotdetectedthattheconsequenceconsistedwithRTPCR.ThceffectofTGFpigenewasdemonstratedfromtheleveroftranscriptionandtranslation.Smad4proteinraisedwiththeleverofTGF01geneatvarioustimepoint,butdisappearedveryqu
6、ickly.CONCLUSION:TGF(31canincreasep21,butdecreaseCDK2,toimpactthecellcycleofHLEC.TGF卩/Smad4pathwaytakepartinthecourse.KEYWORDS:lensepithelialcells;TGF卩1;genestransfer;p21;CDK2；Smad40引言转化生长因子卩（TGF卩）可抑制上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞,以及某些肿瘤细胞的生长，并使这些细胞停滞在细胞周期的第一•个间隔区：G1期，从而阻止细胞进入S期［
7、1］。许多研究表明，高表达活性TGFpl的转基因鼠和其体外培养鼠晶状体均出现晶状体混浊的症状［2,3］,我们的前期实验证明TGFpi可抑制晶状体上皮细胞增殖，改变细胞周期，诱导其发生凋亡。H前已经发现TGF卩信号传导经典途径为:TGF卩配体与细胞膜受体结合，激活细胞内Smads蛋白胁同多种转录因子，最终导致H的基因表达。Smads类蛋白是TGF卩信号转导通路屮必不可少的屮介蛋白，存在于胞质屮［4］。Smad4是通用枢纽分子，与上游分子形成核转运复合物后，将信号由胞质传入核内，协同转录因子上调或下调靶基因的表达。Smad4由
8、于其屮枢作用而被认为是调控TGF卩信号通路的关键分子。我们通过基因转染技术对TGF卩1抑制人晶状体上皮细胞，导致白内障发生的具体作用机制进行探讨。1材料和方法1」材料永生化细胞系HLECB3（屮国医科大学眼科）,HGDMEM培养液（美国Highclone公司），胎牛血清（杭州四季青生物公司），pSNAV
