bcl2基因转染对人胃上皮细胞ges

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1、bcl2基因转染对人胃上皮细胞GES作者：朱丽华，李淑英，周洪霞，习瑾昆，章广玲，周天戟【关键词】bcl2基因【Abstract】AIM：Toobservetheeffectofbcl2genetransfectionontheproliferationofhumangastricepithelialcellGES1.METHODS：Theeukaryoticvectorcarryingthefulllengthofbcl2geneandtheneomycinresistancegene(pcDNA3/bcl2)andtheoneonlycarryingtheneomycinre

2、sistancegene(pcDNA3)plifiedandpurified.TheplasmidofpcDNA3/bcl2ine,andtheemptyvectorpcDNA3totransfectGES1cellsascontrols.Andthen,thecellsediumcontaininganappropriateconcentrationofG418forselection.ThemethodofHRPlabelimmunohistochemicalstainingorphologicchangesofGES1cellsicroscopebyHEstaining.T

3、hecellproliferationaffectedbythetransfectionofbcl2easuredbycellcountingandMTTassay.RESULTS:bcl2geneandthevectorpcDNA3ine.AfterG418selection,thecellsmunohistochemicalstainingshouchmoreobviously.Nomorphologicchangesethodofcellcounting，ptyvectortransfectedcellsanduntransfectedcellsafter6dculture

4、.AndMTTassayshoakesthecellsexpressBcl2protEInsteadilyandhighly,andenhancesthecellsproliferationandmalignancy.【Keyucosa;epithelialcell;GES1;proliferation【摘要】目的：观察bcl2基因脂质体法转染人胃上皮细胞系GES1及其转染后对GES1细胞增殖的影响.方法：以脂质体法转染构成bcl2基因表达的人胃上皮细胞系GES1细胞模型，空载体质粒pcDNA3转染GES1细胞及正常GES1细胞为对照；经酶标免疫组织化学法鉴定bcl2基因表达阳性

5、细胞；用HE染色法进行形态学观察；并采用细胞计数及MTT法分析bcl2转染后对GES1细胞增殖的影响.结果：脂质体法转染bcl2基因后，细胞高表达Bcl2蛋白；HE染色后形态学观察无明显改变；细胞计数法绘制细胞生长曲线结果显示bcl2基因转染6d后细胞生长速度明显超过对照组，MTT法结果显示bcl2基因转染第24,48,72h，A490nm值分别为4.15±0.31，5.98±0.56，8.94±0.79，对照组分别为3.01±0.20，4.76±0.52，7.69±0.84，两组相比较具有显著性差异(P<0.05).结论：bcl2基因转染使GES1细胞稳定且高表达Bcl2

6、蛋白，并促进了细胞增殖.【关键词】bcl2基因；转染；胃黏膜；上皮细胞；GES1；增殖0引言胃癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程.bcl2是近年发现的细胞凋亡调控基因，其异常表达与胃癌、宫颈癌、胃肠道等肿瘤发生发展尤为密切［1-3］.我们探讨bcl2基因在人胃上皮细胞系GES1中的表达情况，探讨该基因表达量与人胃上皮细胞生长特性之间的关系如下.1材料和方法1.1材料正常人胃上皮细胞系GES1，本室保存；质粒pcDNA3由日本北海道大学医学部遗传医学研究所肿瘤病毒学部门高田贤藏教授惠赠；Lipofectamine、DMEM培养液、RPMI1640培养液、MTT、胎牛血清购于Gi

7、bco公司；小鼠抗Bcl2（一抗）、HRP标记山羊抗小鼠IgG（二抗）购于北京华美生物制品公司；Olympus光学显微镜为日本Nikon公司产品.1.2方法细胞稳定转染参照Lipofectamine［4］转染说明书进行，基因转染48h后，换用含300mg／LG418的完全培养基筛选.取待染细胞爬片，固定，滴加30mL/LH2O2，室温孵育15min，滴加1∶100稀释的小鼠抗Bcl2mAb，4℃湿盒中过夜，PBS洗，滴加山羊抗小鼠IgGHRP结合物，37℃，孵育30min，PBS