乳酸菌的筛选及应用

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1、乳酸菌的筛选及应用邹远强2010年7月12日7/22/20211乳酸菌的分类乳酸菌的筛选乳酸菌的应用7/22/20212第一部分、乳酸菌的分类指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌；分为18个属，共有200多种；大部分是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。一、乳酸菌7/22/20213二、乳酸菌的分类运动性：通常不运动，有的能够运动,具有周生鞭毛。营养类型：化能异氧型需氧情况：微好氧性1、乳杆菌属（Lactobacillus）形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一般成链状排列7/22/20214形态：细胞呈球

2、形或卵圆形，成对或成链排列运动性：一般不远动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型2、链球菌属（Streptococcus）7/22/20215形态：细胞球形或豆状，成对或成链排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型3、明串珠菌属（Leuconostoc）7/22/20216形态：细胞呈多样形态：Y字形、V字形、弯曲状、勺形，典形形态为分叉杆菌运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：专性厌氧4、双歧杆菌属（Bifidobacterium）7/22/20217形态：细胞球形，成对或四联状排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌

3、氧5、片球菌属（Pediococcus）7/22/20218第二部分、乳酸菌的筛选乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下：（1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等；（2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等；（3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等；（4）乳酸饮料：酸奶等。一、乳酸菌的分布7/22/20219（一）溶钙圈法利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别

4、能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。二、筛选方法7/22/2021101、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）配方（1L）:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，K2HPO42.0g，柠檬酸三铵2.0g，乙酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，MgSO4·7H2O0.5g，MnSO4·4H2O0.25g配制：1.调PH至6.2～6.4；2.称取20gCaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3乳浊液；3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌；4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量的CaCO3乳浊液

5、，晾干了以后再接种。7/22/202111样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。2、筛选过程7/22/202112（二）溴甲酚绿指示剂法1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液）2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。7/22/202113（三）几种乳酸菌筛选举例样品来源：市售酸奶培养基：M17改良培养基培养温度：42℃需氧情况：兼性厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线

6、分离1、嗜热链球菌7/22/2021142、保加利亚乳杆菌样品来源：市售酸奶培养基：牛肉浸膏1.5％，酵母浸膏0.5％，葡萄糖3.0％，柠檬酸三铵0.2％，七水硫酸镁0.02％，琼脂1.5％，pH5.1。培养温度：42℃需氧情况：兼性厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法7/22/202115样品来源：婴儿新鲜粪便培养基：MRS培养基、NPNL培养基、TYP培养基、PTYG培养基培养温度：37℃需氧情况：严格厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法3、双歧杆菌7/22/202116第三部分、乳酸菌的应用一、乳酸菌的生理功能①维持肠道菌群的微生态平衡；②增强机体

7、免疫功能；③预防和抑制肿瘤发生；④提高营养利用率、促进营养吸收；⑤控制内毒素、降低胆固醇；⑥延缓机体衰老。7/22/202117二、乳酸菌的应用1、乳酸菌在食品、饮料中的应用（1）酸奶；（2）乳酸饮料；（3）酿造调味品中的应用；（4）功能性食品的开发；（5）防腐、保鲜；（6）肉制品加工；（7）腌渍物等。7/22/2021182、乳酸菌在医药中的应用（1）乳酸菌素；（2）γ-氨基丁酸(GABA)7/22/2021193、开发可降解的聚乳酸塑料7/22/202120（1）聚乳酸（PLA）简介聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学合成方法聚合而成的一种高分子材料，它

8、无毒、无刺激性。聚乳酸制