产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

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1、产细菌索乳酸菌的筛选及鉴左摘要：采用琼脂平板扩散实验，从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌(Listeriamonocytogene54002)具有明显抑制作用的乳酸菌，排除酸和过氧化氢的干扰后，仍具有抑菌活性，而用胰蛋口酶和胃蛋口酶处理以后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质，即细菌素。三株菌所产细菌素具有一定热稳定性，在PH5〜10Z间仍具有一•定的抑菌活性。通过生理牛化实验和16SrRNA基因序列分析対3株菌进行了鉴定。PCR扩增得到1600bp左右的16SrRNA基因序列，将序列通过BLAST软件在NCB1网站上进行同源性对比，并通过

2、MEGA5.0软件绘制系统发冇树。结果显示3株菌的16SrRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上，这与生理生化实验初步鉴定结果一致。关键词：细菌素，筛选，屎肠球菌Identificationandscreengingofbacteriocin-producinglacticacidbacteriaAbstract：ThreelacticacidbacteriumwereisolatedfromHunantraditonalformcntodmeats,whichexhibitedstronginhibitoryactivityagainstListeria

3、monocytogenes54002.Aftereliminatingtheinterferencefactorssuchastheorganicacids,hydrogenperoxides,theinhibitoryactivitystillexisted・Butinhibitoryactivitywaslostaftertreatmentwithtrypsinandpepsin.Therefore,theinhibiotorysubstaneecouldbeclassedasbacteriocin.Thebacteriocinexhibitedgoodthermals

4、tabilityanditsactivepHrangefrom5~10.Thethreebacteriocin-producingbacteriawereidentifiedonthebaseofphysiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrRXAgenesequence.Thesequencefragmentsaround1600bp16SribosomalRNAwereamplifiedfromtotalDNAofthethreeisolatedstrainsbyPCR・Thesequeneowascompletedb

5、ytheapplicationofBLASTonthewebsitesofNCBTandphylogenetictreewasdrawnwithMEGA5・0・Accordingtothehighhomologyof16SrRNAsequence,thethreebacteriocin-producingbacteriawasidentifiedasEnterococcusfaecium.Keywords：bacteriocin；screening；Enterococcusfaecium细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质，是山细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产牛的一类多

6、肽类物质[1]。细菌素的抑菌范围一般包括i些亲缘关系和近的细菌，而产生菌对其细菌素具有口身免疫性。口前研究最为深入的细菌索是乳酸链球菌肽（Nisin）,又称乳酸链球菌素，是由乳酸链球菌产生的一种多肽，它于1969年得到FAO和WHO的认可，是唯一允许作为防腐剂在食品中使用的细菌素，虽然细菌索已被许多国家允许作为食品添加剂放入食品中，但是也存在很大的缺陷，比如抑菌谱较窄，抑菌活性在碱性条件下不稳定[2]等，寻找高产细菌素以及更稳定的细菌索成为研究的热点。作为细菌索的主要产生菌，乳酸菌生境广泛，数最众多。近年来，国内外学者为获得结构新颖、抑菌活性更为稳定的细菌素，广泛地从当地传

7、统的发酵食品中，尤其是发酵肉制品中进行产细菌素乳酸菌的分离筛选O如deCarvalho从意人利salami香肠屮[3]分离到一•株能抑制李斯特氏菌的乳酸菌，Noonpakdee[4]从泰国传统发酵香肠nham中分离到一株产Nisin的乳酸乳球菌；Martinis[5]从巴西传统发酵肉制品中共分离得到三株产细菌素乳酸菌，抑菌结果显示，三株菌都具存较强的抑制李斯特氏菌能力；Todorov[6]从匍萄牙传统发酵猪肉制品屮分离到两株产细菌索的植物乳杆菌，而212生物工程2013年第20期Vol.34,No.20,2013菌