胆碱能抗炎通路在类风湿关节炎中的作用及机制研究

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1、博士学位论文中文摘要胆碱能抗炎通路在类风湿关节炎中的作用及机制研究中文摘要研究背景：类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以累及周围关节为主的系统性炎症性自身免疫病，致残率高，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要疾病之一。近年研究表明炎症细胞因子网络在RA的滑膜炎症及骨质破坏中起到重要作用，是使RA病变持续存在、迁延进展的关键因素。肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，n师)．Gt和白介素(interleukin，IL)．1被认为是在RA发病过程中起主要作用的促炎因子口因而，采用多种途径抑制体内促炎因子成为探索

2、RA治疗策略的主要思路，并已取得一些令人鼓舞的进展。然而，除了TNF．Q拮抗剂因其疗效确切已经进入临床之外，大部分以细胞因子为靶标的干预措施还处于早期的动物试验或I期临床；此外，也有一部分病人对TNF．仅拮抗剂的反应欠佳；即使是反应性较好的病人，要获得RA的长期控制，也需持续用药，或需与经典的控制病情药物联用，否则将面临疾病的复发。这些结果促使人们尝试寻找新的抑制炎症介质的方法，以求取得更好的疗效。新近研究发现：在中枢神经系统与免疫系统之间存在一条具有拮抗炎症反应作用的通路一胆碱能抗炎通路(cholinergicanti．inflammatorypath

3、way)，该通路由迷走神经及其递质乙酰胆碱和胆碱能受体所构成。大量动物实验结果表明刺激迷走神经和使用胆碱能激博士学位论文中文摘要动剂烟碱和卡巴碱在内毒素血症、创伤、败血症等急性全身性炎症中可抑制n吓．Q、IL．1、IL．6、HMGBl等炎症因子的生成和释放，抑制NF．r．B信号通路，发挥抗炎作用。但该通路在慢性炎症性疾病RA中是否发挥抗炎作用及作用机制，目前国内外尚未见报道。本研究拟选用SD大鼠，RA患者原代滑膜细胞为主要材料，以佐剂性关节炎大鼠和TNF．a刺激滑膜细胞诱导炎症作为主要模型，观察胆碱能激动剂烟碱对佐剂性关节炎大鼠及TNF．a诱导的滑膜细胞

4、炎症的影响，采用Westernblot，RT．PCR，细胞间接免疫荧光，免疫组化，ELISA等研究手段从整体、细胞及分子水平探讨胆碱能抗炎通路对类风湿关节炎的影响。开展本项目研究，可望阐明胆碱能抗炎通路的在RA的抗炎作用及其分子机制，为RA以及其他炎症疾病的治疗提供新的思路和策略。第一部分烟碱对大鼠实验性关节炎的保护作用及对炎症因子的影响目的：探讨烟碱对佐剂性关节炎大鼠的炎症、关节破坏的干预作用和对炎症因子的影响。方法：将64只SD大鼠饲养一周后，按体重匹配随机分为四组，正常组：注射生理盐水，每天两次；模型组：使用完全弗氏佐剂(CFA)造模，注射生理盐水

5、，每天两次；大剂量烟碱组：使用CFA造模，II博士学位论文中文摘要腹腔注射0．2mg／kg的烟碱，每天两次；小剂量烟碱组：使用CFA造模，腹腔注射0．05mg／kg的烟碱，每天两次。从造模第1天开始腹腔注射。肉眼观察足肿胀并进行关节炎指数(arthritisindex，AI)评分，组织病理学对滑膜炎，放射学和组织病理学对关节破坏进行评分，放射学评分采用Larsen评分标准。第37天处死所有大鼠，心脏采血，ELISA法检测血清TNF．a和IL．1p浓度，Westernblot检测血清中HMGBl蛋白水平，免疫组化检测滑膜和关节中I-IMGBl表达。结果：l

6、烟碱对佐剂性关节炎大鼠的保护作用：(1)造模第24天至32天，大剂量烟碱组关节炎发生率均低于模型组(尸

7、身炎症因子的影响：大剂量烟碱组血清TNF．仅、IL．113和HMGBl的含量较模型组显著降低(P

8、关节炎的发生和减轻关节肿胀，改善滑膜炎及骨质破坏。2烟碱可降低佐剂性关节炎大鼠血