大白菜游离小孢子培养技术研究及初步应用

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1、77495Z分类号：$634．103Q943．1密级：福建农林大学硕士学位论文单位代码：10389学号：1020604大白菜游离小孢子培养技术研究及初步应用学科专业：研究方向：研究生：指导教师：完成时间：蔬菜学蔬菜遗传育种牛媛媛陈文辉研究员林义章副教授二00五年四月独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师的指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文

2、中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名：冉壤是．日期：2。05年6月1日l论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。不保密，本论文属于不保密。日期：2005年6月1日nv摘要以50个基因型大白菜(Brass[cacampestrisssp．p

3、ekinensisLour．)品种为试材，采用游离小孢子培养方法，对影响小孢子胚诱导的因素，促进小孢子植株再生的方法，小孢子再生植株的培养，小孢子再生植株倍性的鉴定，以及小孢子再生株纯系的选育进行了研究，获得了下列结果：1．大白菜游离小孢子培养能在较大基因型范围内成功获得小孢子胚。不同基因型大白菜试材问小孢子胚胎发生能力有很大差异，30个中晚熟大白菜品种有23个产生胚状体，20个早熟大白菜品种中有16个产生胚状体，分别占供试品种的76．6％和80．0％：其中中晚熟大白菜基因型平均产胚量50个‘蕾～，

4、最高的达i00个蕾～，早熟大白菜基因型平均产胚量32个‘蕾～，最高的达78个蕾～，分别是同种类型中产胚量最低的基因型的25倍和32倍。而这两种类型间的小孢子胚胎发生率无显著差异。2．小孢子发育时期与花蕾大小有一定关系。供试材料适于游离小孢子培养的花蕾长度为2．0～3．Omm，此长度的花蕾大部分小孢子处于单核靠边期；供体植株在较高营养水平下盛花期时且气温稳定在14～24"C的生理状态最适于游离小孢子培养。3．NLN培养基适于游离小孢子胚的诱导。在NLN培养基中添加外源激素0．05mgL-。6一BA+0

5、．1mg’L1NAA及O．59L-1活性炭琼脂糖悬浮液对小孢子胚发生及发育有一定促进作用；13％的蔗糖能够提供适宜的糖源和渗透压。对离体小孢子高温预处理是诱导胚胎发生的必要条件，而对花蕾低温预处理不能诱发胚的发生。4．胚状体成苗率与胚胎发育程度密切相关，胚胎越大越容易成苗。小孢子植株主要来源于子叶型胚。适宜的成苗培养基琼脂浓度为1．2％，培养基中添加0．02％NAA有利于小孢子苗根的生长。采用2份泥炭土和1份蛭石混合的基质适合小苗的培养。对小苗注意保湿，移出温室后炼苗一周，可使植株成活率达90～10

6、0％。5．将再生植株移植在田间自然条件下生长正常，经人工观察鉴定，自然加倍率在80％以上。通过对DH植株的观察鉴定选育，育成了一系列优良亲本纯系。关键词：大白菜；游离小孢子：胚状体；植株再生；DH纯系2ABSTRACTFiftygenotypeswereusedforisolatedmicrosporecultureinChineseCabbage(BrassJcacampestrisssp．pekinensisLour，)．Thestudiesincludedaffectingfactorstom

7、icrosporeembryogenesisandmicrosporeplantsregeneration．themethodsofincreasingmicrosporeplantsregenerationrate．theploidyidentificationofmicrosporeplantsandtheselectionofparenthomozygouslines．Themainresultswereasfollows：1．Inmicrosporeembryogenesiscapacity

8、，therewasverygreatdifferenceineachgenotype．Theembryoidinducementfrequencywas76．6％inthemiddle—and—late—maturevarieritesand80．0％intheprematureOnes．Andthehighestembryoidyieldwasi00and78perbud．2．Thecytologicalobservationshowedthatmostofthem