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1、大白菜游离小抱子培养技术高效体系的研究木期视点2014(8):12-16病虫防控产业市场人门菜游离小殖子培养技术高效体系的研究李菲1,2张淑江1章时蕃1张慧1孙日飞1*张振贤2新栽优培品管种理(1中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081；2中国农业人学农学与生物技术学院，北京100193)摘要：以人门菜吉红82、#534DII群体及#438群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小抱子与人工挤压提取小抱子对人口菜游离小砲子活力及提収量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同吋提取多份
2、样品，并可快速调整小他子的培养浓度。收集40个适期花蕾于5ml,离心管内，3000r•min~l破碎10s,将提取的小也子定容于25mLNLN-13培养基，可确保小也子浓度在适宜培养范I韦I内，并成功诱导胚胎发生。关键词：人门菜；游离小他子培养；细胞破碎仪游离小抱子培养技术(isolatedmicrosporeculture,IMC)是近年來兴起的单倍体培养方法，具有单细胞、单倍体和较高胚胎发生率等优点，可以迅速获得人量纯合的双单倍体植株，为植物育种和基础研究创造了广阔的应用前景。I’ichter(1
3、982)首次报道甘蓝型汕菜小砲子培养成功获得了小也子胚状体及其再生植株，推动了十字花科芸蔓属蔬菜作物小抱子培养的兴起，芸蔓属作物游离小也子培养技术得到了快速发展(付颖等，2011；Ferrie&Caswell,2011；顾祥昆等，2013)。pekinensis人白菜(BrassicacampestrisL.ssp.(Lour)Olsson)是原产于我国的重要蔬菜作物，在我国芸墓属蔬菜中种植血积最人、种类最多，在生产屮占据十分重要的经济地位，围绕人门菜育种与研究开展的小抱子培养受到了极人重视。近年来，
4、国内外学者针对影响人门菜游离小也子培养效率的诸多因素进行了广泛的研究，明确了小也子的发育时期、前期预处理以及供体植株的生长条件、培养基成分等因索均会影响人门菜小抱子培养的胚前，通过技术改良，已建立起较为成熟的人门菜小砲子培养体系(李菲等，2009),成为芸蔓属蔬菜游离小饱子培养研究的主要作物之一。人量研究显示，基因型是决定小他子胚胎发生能力的主要因索(Ajisakaetal.,1999；Zhangetal.,2003),但与之相关的功能基因的研究还未见新进展。1=1前，集屮进行人群体材料小抱子培养难度
5、较人，缺乏高效、稳定的培养体系。现有的培养体系在小砲子提取坏节主要依靠手工挤压，小砲子胚胎诱导效果受人为因索干扰较人，工作效率低，是开展群体材料小砲子培养研究的主要障碍。因此，提高小他子培养的机械化操作、降低人为干扰、建立高效培养体系，是推动游离小他子培养硏究深入开展的前提。木试验尝试将机械化操作引入人门菜游离小他子培养体系，利用细胞破碎仪提取小抱子，研究其对小沦子胚胎诱导效果的影响，以期建立高效的人门菜规模化小抱子培养体系，为集中开展人群体小抱子培养、进一步探讨小他子胚胎发生的相关研究萸定基础。胎发
6、生率(张凤兰等，1994；刘凡等，2001)o日1材料与方法李菲,女,副研究员，专业方向:蔬菜遗传育种,E-mail:lifei@caas*通讯作者(Correspondingauthor):孙日飞，男，研究员，专业方向：蔬菜遗传育种，E-rmi订：sunrifei@caas收稿日期：2013-12-28；接受日期：2014-01-28基金项日：“十二五”农村领域国家科技计划项日(2012AA100202),1.1材料供试材料为屮国农业科学院蔬菜花卉研究所门菜课题组选育的人白菜品种吉红82及#534D
7、H群体材料和#438群体材料。2012年12月26日催芽“十二五”国家科技支撑计划项目(2012BAD02B010),农业部园艺作物播种于中国农业科学院蔬菜花卉研究所育苗室，进生物学与种质创制重点实验室项口行低温春化处理，2013年3月6日定植于日光温邑老邑邑邑邑老邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑邑12—室，常规栽培管理玄至抽蔓开花。1.2游离小抱子的机械化提取以吉红82为试材，选取长2〜3mm.小饱子主要处于单核靠边期的花蕾，先用75%酒精浸泡30s,7%次氯酸钠溶液洗涤15min,无菌蒸镭水冲
8、洗3遍；然后加入B5改良提取液，进行小砲子提取（李菲等，2009）o采用细胞破碎仪（T0MYMS-100R）进行小砲子的机械化提取。取50个适期花蕾于5ml,离心管内，添加B5改良提取液至5mL,以直径0.8cm的钢珠破碎花蕾。设计破碎转速分别为2000、本期视点病虫防控新产业市场的小砲子（Satoetal.,1989）,小抱子浓度为栽1X105〜3X105个・inL-1,分装于60mmX15nun的培养皿小，每HR3inL,Parafilm后33°C热
