花椰菜游离小孢子培养及再生植株研究

《花椰菜游离小孢子培养及再生植株研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河南农业大学硕士学位论文题目蕉翅苤澧妻．丛!塑壬埴菱叠豆生焦速硒究一一一——学位审请人姓名墓鍪——导师姓名签途强．煎援．．一——学科专业蕴苤堂．一一一研究方向蘸苤遂佳立弛r11围郑州2006年5月致谢本论文是在孙治强教授悉心指导和亲切关怀下完成的．导师在论文的选题、试验的设计、实施和论文的撰写等方面都给予了悉心的指导和帮助。恩师渊博的知识、严谨的治学态度、宽以待人的高尚品质时时都在激励着我，并将使我受益终生。导师的关怀厚爱和谆谆教导，我将永远铭记于心。郑州市蔬菜研究所刘卫红、刘艳波研究员，沈阳农业大学许明教授对试验提出过宝贵意见。吴海东、路翠玲、曾维银、陈曼

2、、冯灵渊、白建军、史小强、王建彬等各位同事在实验中给予了悉心指导和帮助，在此深表感谢!最后，对所有关心、支持和帮助过我的老师、同学、同事及朋友表示我最由衷的谢意!河南农业大学硕t学位论文摘要以17个花椰菜品种为试材，进行游离小孢子培养，对花椰菜小孢子胚状体诱导的影响因素，提高小孢子植株获得率的方法、小孢子植株的继代培养，生根及移栽技术进行了研究，旨在建立起完善的植株再生体系，研究结果如下．1．在小孢子胚胎发生能力方面，不同基因型材料之间成胚能力存在很大差异。在试验所用的17个基因型花椰菜材料中。有6个获得了胚状体，成功率达35．3％．其中魁首(BARKHA)

3、、白马王子50天产胚量最高。平均每30个花蕾产量分别达180、169个胚．2．适合花椰菜小孢子培养的蔗糖浓度为13％，随着蔗塘浓度的增大，小孢子出胚率呈下降趋势；适合花椰菜游离小孢子培养的活性碳浓度为500mgL_1，变化趋势为随着活性碳的浓度增加，出胚率增加，当活性碳浓度增加到一定的数值时。出胚率随着活性碳浓度的增加而下降；培养基添加的AgN03浓度为60mgL4时，小孢子的出胚率最高，达虱1244个，30个花蕾。3．小孢子发育程度与花蕾大小的关系因品种而异，魁酋(BARKHA)、白马王子50天适宜进行小孢子培养的花蕾大小为花蕾长2．7～3．19ram。不

4、同基因型的小孢子发育同步性差异不大。适合花椰菜游离小孢子培养的小孢子发育时期为单核靠边期至双核早期。4．在培养基中添加激素可以提高花椰菜小孢子胚的诱导效率。培养基中添加一定浓度的6一BA和N从，可以很大程度地提高成胚率，适宜浓度为0．05mg．r1的6一BA和0．1mg．L‘的N从。5．在4℃下进行Oh(对照)及24～120h不同时间冷激处理，采用相同的小孢子分离方法，结果表明低温处理能提高花椰菜胚状体的产量，适宜时间为24h，随着时间的延长，胚产量下降；33℃高温热激处理24h，能够有效地提高花椰菜游离小孢子出胚率，在此条件下泰国耐热AS0天的出胚率达到了

5、87个胚／30个花营；’6．胚状体成苗率与胚胎发育程度密切相关，胚胎越大越容易成苗。萌发胚成苗率最高，可达78．12％，子叶胚成苗率可达65．51％：发育早期的胚胎心形胚和球形胚难以成笛。7．在一定范围内，胚状体成苗率随培养墓水分含量的增加而降低。结果表明，琼脂含量为I．2％培养基既能满足胚状体萌发所需要的干燥环境。又能保证胚萌发所需的水分，是较适合成苗的培养基。．8．“MS+NAA0，2mgL4+3％蔗糖+o．8％琼脂’’的培养基中的植株生根最好．平均为13．85条，植株的成活率也最高，为81．25％，是小孢子植株生根适宜的培养基。‘关键词：花椰菜，小孢子

6、培养，胚状体，植株再生4扣『南农业大学硕士学位论文1文献综述小孢子是高等植物生活史中雄配子体发育过程中短暂而重要的阶段，是减数分裂后四分体释放出的单核细胞。游离小孢子培养(Isolatedmicrosporeculture)是指不经过任何形式的花药预培养，直接从花蕾或花药获取游离状态的新鲜小孢子群体进行培养的方法。1973年，lqitsch和Norreel／11在进行花药培养研究的同时，发展了游离小孢子培养技术．由于从花药中游离出来的小孢子是具有天然分散性的单倍体细胞和较高的同步性特点，这不仅便于进行各种遗传操作，而且由此直接发育而来的胚胎及其再生植株在遗传

7、上是纯合的．在蔬菜作物遗传育种中应用游离小孢子培养技术，能大大缩短亲本纯台的时间，加快育种进程，提高所需基因组合的选择效率，还可排除花药壁组织的影响，因此，这一技术受到了育种工作者的重视。已逐渐应用于各种蔬菜作物的遗传育种研究工作中，并得到了较大的发展。芸薹属植物游离小孢子培养始于1982年，Lichter(1982)12]首次报道在甘蓝型油菜(Brassicanapus)上成功地用游离小孢子培养方法得到了胚状体。1985年ChuongPV例将热激处理的方法用于游离小孢子培养中，1987年SwansonEBHI创造了从完整的花蕾机械分离小孢子的方法，1988

8、年KonL．Sp’明确了适宜于小孢子发育的时期。随后