青花菜小孢子再生植株加倍及倍性鉴定-论文.pdf

《青花菜小孢子再生植株加倍及倍性鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、Vegetables2014．1试验研究青花菜小孢子再生植株加倍及倍性鉴定张振超，戴忠良，秦文斌，姚悦梅，潘永飞，肖燕，潘跃平(江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏句容212400)摘要：采用秋水仙碱溶液对单倍体植株进行花器官形态、角果形态等特征)、显微结构法(气孔诱导，并采用流式细胞仪及保卫细胞叶绿体染色大小、保卫细胞叶绿体数目、花粉粒大小和形态等)、法对青花菜小孢子再生植株群体的倍性进行分析。染色体计数法(包括体细胞染色体和花粉母细胞染结果表明，小孢子再生植株群体单倍体和二倍体色体)以及流式细胞仪DNA含量分析法，这些方法所占比例基本一致；采用200mg／L秋水仙碱处

2、理中准确性最高的是染色体计数法和流式细胞仪DNA单倍体植株20h后，3个供试基因型植株的存活含量分析法。率分别为88．9％、90％和100％，二倍体诱导率分近年来研究发现，植物叶片气孔保卫细胞叶绿别为66．7％、70％和77．8％，另外还得到1株四倍体数目与植株倍性之间存在相关性。观察保卫细胞体植株。采用FDA荧光染色和1％I—KI染色法可叶绿体数的方法有FDA荧光染色法和1％I—KI染色清楚地观察到不同倍性间植株气孔大小和形态以法。Michael等采用FDA荧光染色法对西瓜保卫及保卫细胞叶绿体数存在显著差异；单倍体植株细胞叶绿体进行染色，清晰地观察到二倍体和四倍气孔长度

3、约为20pm，二倍体约为25pm，而四倍体保卫细胞叶绿体数分别为9．7个和17．8个，差异体大于33pm；单倍体保卫细胞叶绿体数为7个显著；袁素霞等0采用1％I—KI溶液进行染色，清左右，二倍体约13个，而四倍体最多超过23个。楚分辨出叶绿体形态和数目，并建立了甘蓝和青花1％I—KI染色法对设备要求简单，宜普遍采用。菜保卫细胞叶绿体数与倍性的关系。笔者以不同基关键词：青花菜；小孢子再生植株；染色体；因型青花菜为试材，采用秋水仙碱溶液对小孢子再气孔；保卫细胞叶绿体；倍性鉴定生植株进行加倍处理，并采用流式细胞仪DNA含量分析法和显微结构法观察保卫细胞叶绿体数目来通过小孢子培养

4、获得的再生植株在理论上都是鉴定植株倍性，研究和探讨甘蓝类植物小孢子再生单倍体，而由于单倍体植株育性差，往往不能被直植株加倍和倍性鉴定效果。接利用，需要采用人工诱导进行加倍处理，使之成1材料和方法为双单倍体(DH)植株。秋水仙碱诱导是最常用的加倍方法。前人采用秋水仙碱溶液浸根、培养基1．1试验材料中添加秋水仙碱]、处理次生芽或点滴生长点选用小孢子培养胚胎发生效果较好的青花菜品等，均获得了较好的效果。由于存在自然加倍因素，种里绿、美绿410、久绿作为供试材料。供试材料小孢子再生植株群体通常是由单倍体、二倍体和多于2011年8月底于温室内采用穴盘基质育苗，9月下倍体组成的混合群

5、体。采用秋水仙碱溶液处理的小旬优选生长旺盛、无病虫害的植株定植于大田，采孢子再生植株群体的倍性水平也不一致，需要采用用常规田间管理。2012年3—4月，室外平均温度一种高效、简便的鉴定方法进行辨别。常用的倍性1O～15℃时取单核晚期至双核早期的花蕾为试材鉴定方法有植株形态法(包括植株长势、叶色叶形、进行游离小孢子培养。基金项目：江苏省自主创新项目(CX(12)2004)；科技支撑项目(BE2011315)。通讯作者：潘跃平．15—!l=试验研究Vegetables2014．11．2小孢子的分离培养与植株再生泡3～5min后取出，置于载玻片上，用l％I—KI染小孢子的分离、

6、培养与植株再生方法参照张振色30S，盖上盖玻片后计数即可。超等的方法。1．4．2FDA荧光染色法观察保卫细胞叶绿体1．3秋水仙碱加倍处理采用Michael等的方法。用0．01％FDA对叶将生长旺盛、根系健壮的再生植株在室温条件片下表皮进行染色，采用倒置荧光显微镜进行观察下炼苗3～5d，从培养基中取出，把培养基清洗干净，并拍照。在荧光显微镜下，被FDA染色的叶绿体发先把根部浸入到质量百分比浓度为75％～80％的百出绿色荧光，没有被染色的呈现红色。每个植株取菌清800～1000倍液中杀菌5min，捞出控水后移2个叶片，显微镜下随机观察l0个视野，统计气孔栽到装入营养土的穴盘中

7、，置于温室中培养。用塑长度以及叶绿体数目。料薄膜遮盖保湿，并遮盖黑色遮阳网，以备光照强1．4．3流式细胞仪倍性分析度大时遮阳。温室内白天温度控制在(28_+5)℃、参照张振超等的测定方法，以普通二倍体夜晚温度在(25±3)oC，光照为自然光照，在光照嫩叶作对照。强烈时遮盖黑色遮阳网以降低温度。生长1周后，1．5数据分析取出幼苗，用自来水洗净根部表面的营养土后，把所得数据采用SAS软件进行差异显著性分析，植株根部浸入浓度为200mg／L的秋水仙碱溶液中并在0．05水平上进行Duncan多重比较分析。20h，后用自来水冲洗干净，重