大白菜游离小孢子培养和植株再生

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1、大白菜游离小孢子培养和植株再生摘要：以4个福山包头系列大白菜品种为试材，对游离小孢子培养和植株再生过程中的一些重要因素进行了研究。结果表明，不同基因型对小孢子胚诱导率和成苗率影响较大，平均每个花蕾产胚在1.28～38.25个之间；且胚胎发生能力高的品种，成苗率较高，胚胎发生能力低的品种，成苗率也较低；培养基中添加0.1～0.3g/L活性炭能明显提高小孢子胚诱导率；及时将成熟的子叶形胚转移至再生培养基上，对提高成苗率至关重要；琼脂浓度为1.0%～2.0%时，成苗率大大提高。关键词：大白菜；游离小孢子；培养；活性炭中图分类号：S634.1

2、03.6文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）03-0013-04AbstractThefactorsaffectingisolatedmicrosporecultureandplantregenerationwerestudiedwithfourChinesecabbagevarietiesof‘Fushanbaotou’.Theresultsshowedthatthereweresignificantdifferencesinembryogenesisabilityofmicrosporeandseedlingra

3、teamongdifferentgenotypes.Theembryoyieldperbudrangedfrom1.28to38.25.Thevarietieswithhigher9embryogenesisabilityhadhigherseedlingrate，whilethosewithlowerembryogenesisabilityhadlowerseedlingrate.Theadditionof0.1～0.3g/Lactivecharcoalcouldincreasetheinductionrateofmicrospor

4、e-derivedembryossignificantly.Transferringmaturecotyledonaryembryostoregenerationmediumintimewasessentialtoincreaseplantletregenerationrate.Thesolidmediumwithagarconcentrationfrom1.0%to2.0%couldincreaseseedlingrateobviously.KeywordsChinesecabbage；Isolatedmicrospore；Cult

5、ure；Activecharcoal大白菜是原产我国的一种重要蔬菜作物，在南北方均有广泛种植[1，2]。目前生产上主要通过杂交育种获得新品种，游离小孢子培养由于其自身的优点，逐渐成为大白菜育种的重要手段之一[3～9]。自Sato等[10]首次利用大白菜小孢子获得再生植株以来，国内各科研机构也陆续对大白菜游离小孢子培养的各个影响因素进行了研究[11]，但由于受基因型和其他一些因素的影响，在小孢子胚胎诱导和再生成苗方面仍然很难形成统一的标准。9福山包头类型大白菜是优良的地方栽培品种，由于该类型大白菜在抗病毒病方面缺陷，使得种植面积逐渐下降

6、，目前生产中使用的包头类型大白菜多为当地品种和外来品种的杂交种。为了加快遗传改良进程，缩短育种周期，对4个福山包头系列大白菜进行游离小孢子培养，对影响小孢子胚状体发生和植株再生的主要因素进行研究，以期建立起完整的培养体系，获得DH纯系。1材料与方法1.1试验材料试验于2010年10月～2013年10月在中国农业大学烟台研究院进行。供试大白菜品种为‘福山包头莲’（001）、‘新烟杂3号’（002）、‘奇山秋美’（003）、‘金盛秋早’（004），由中国农业大学烟台研究院蔬菜课题组提供。供试材料于11月下旬育苗，次年2月下旬定植于试验田，

7、3月下旬至4月下旬取花蕾进行试验。1.2试验方法1.2.1游离小孢子培养大白菜植株现蕾后，于每天上午8∶00～10∶00摘取健壮植株花序，选取长度为2.0～2.5mm的花蕾，参考付文婷等[12]的方法进行小孢子培养。①基因型对小孢子胚胎发生的影响：取4种试材合适大小的花蕾，按平均每个培养皿4个花蕾进行游离小孢子培养。②活性炭对小孢子胚胎发生的影响：取4种试材合适大小的花蕾，分别用添加有0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5g/L活性炭的NLN-13培养基进行游离小孢子培养。9以上每个处理3皿，重复3次。1.2.2小孢子胚再生成苗将

8、培养21d的子叶形胚状体接种于B5+6-BA（0.2mg/L）+IAA（0.02mg/L）固体培养基上（含3%的蔗糖，pH5.8），其余参考邓英等[13]的方法。①基因型对小孢子胚成苗的影响：将4种基因型的子叶形胚接种在