萝卜游离小孢子培养和核型的分析

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1、南京农业大学硕士学位论文萝卜游离小孢子培养与核型分析姓名：赵艳玲申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：龚义勤;柳李旺20080601摘要萝I＼游离小孢子培养与核型分析生物技术的不断发展争完善，为萝卜育种提供了暂的思路扣手段，游离小孢子培养r-4支术的应用大大加快了萝卜的育种进程。本研究利用13份萝卜材料，进行游离小孢子培养胚状体诱导与再生植株形成体系的优化，同时对再生植株的继代快繁、倍性鉴定进行相关的探讨。并对部分供体植株的染色体数目和核型进行系统的分析，为萝卜的遗传育种提供初步的细胞学依据。结果如下：1．研

2、究发现基因型严重影响出胚率，13个供试材料有9个诱导出胚状体，其它4个没有诱导出任何形状的胚状体。胚状体诱导率差异很大，从最高每蕾可得到17．03个到最低每蕾只得到0，12个，同时还发现杂交种的出胚率明显高于自交系的。2．32．5℃热激48h对于小孢子启动分裂非常必要，未经32．5℃热激处理的小孢子，在所有基因型中均未诱导出胚状体。3彳q用瓣药比(花瓣长尉花药长度)可以准确的判断小孢子的发育时期，瓣药比等长或花瓣微短于花药的花蕾(花瓣长度，花药长度：0．75—1)被认为是最适宜选取进行小孢子培养的，此时的小孢子

3、几乎都处于单核靠边期。4．不同的培养基的培养效果也有差异，NLN．13最有利于萝卜游离小孢子培养，培养基中大量元素的减半与否不是影响萝卜出胚率的主要因素。5．NLN．13中添加O．759／L的：；-g性炭有助于提高胚状体的产量和质量。6．低温处理(4℃)只是暂时保存材料使之不降低培养效果的一种有效的方法，并不能显著提高诱导率。7．随着6．BA含量增加，诱导率先增高，再下降，小孢子胚诱导率最高的6一BA浓度是0．10mg／L，浓度高"I-10mg／L，随浓度加大，胚产量呈下降趋势。8．将子叶胚转绿后继代在B5(蔗

4、糖3％+琼脂0．8％+6-BA0．2mg／L+NAA0．02mg／L+活性炭0．1％)上，胚状体成活率明显高于继代在MS上的。实验认为生根培养基：B5+蔗糖3％+琼脂0．8％+NAA0．2mg／L最适宜萝卜-再生植株生根，生长的根系粗壮整齐。在温度(25*(2)、湿度(85％)和光照条件(4000Lx)适宜的情况下，小孢子植株的移栽成活率可以达至,185％-95％。9．再生植株的鉴定：应用形态学、细胞学和流式细胞仪可以快速鉴定花粉植株。染色体鉴定结果：单倍体植株n--x=9，正常二倍体2n=2x=18，四倍体4

5、n=4x=36；流式细胞仪鉴定结果：单倍体材料DNA相对含量=100，二倍体材料DNA相对含量=200，四倍体材料DNA相对含量=400。综合上述几种鉴定方法，可以在短期内对大量的再萝卜游离小孢子培养与核型分析的研究生植株进行快速而准确的鉴定。10．采用常规压片法，对3种不同皮色、2种不同地域萝卜染色体数目和核型进行分析。研究表明，它们的染色体数目均为2n=2x=18，核型公式可分别表示为NAU—SJMSH：18m，属1A型，核不对称系数52．27％；NAU—WYQ：2M+16m，属lA型，核不对称系数51．1

6、6％；NAU-YZBLB：18m，属1A型，核不对称系数52．47％；NAU．ZSDG：18m(2SAT)，属1A型，核不对称系数51．93％。根据核型分析的结果，初步讨论了它们之间的亲缘关系，绿萝卜相对红萝卜、白萝卜较原始。核型不对称系数显示：日本的NAU-ZSDG比中国的NAU．YZBLB原始，初步推测日本也是萝卜的起源地。关键词：萝卜；胚胎发生；植株再生；倍性鉴定；核型分析ⅡISoLATEDMICRoSPoRECULrUREANDKARYoTYPEANALYSISINRADISHABSTRACT111ed

7、evelopmentandimprovementofbiotechnologycontinuously，whichoffersomenewwaysandmeansforradishbreeding．Microsporecultureacceleratestheprocessofelitecultivardevelopment．Inthisstudy,13genotypesofradishwereused,tooptimizethetechniquesystemofisolatedmicrosporecultur

8、e．Atthesametime，plantletregenerationandploidyidentificationwerestudied弱wellaskaryotypeanalysis．啊1emainresultswereaSfollows：1．Of13genotypes，onlyninecouldproducedemb巧oids谢nlavariousproductionrater