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5、费论文农科论文农科论文正文3edu教育网,百万资源,完全免费,无需注册,天天更新！不同基因型青花菜游离小孢子培养的几个方法分析青花菜(Brassicaoleraceavar.italica),俗名绿菜花。由于其营养价值高,尤其是在抗癌功能上为同类蔬菜之首,深受消费者青睐。我国青花菜品种多为国外引进,种子昂贵。为培育新的种质资源,育成优质青花菜品种,常规方法需经过杂交、回交和自交分离,选育出理想的材料常常需要好几个世代。而在青花菜育种中利用小孢子组织培养,不仅可快速得到双单倍体纯系,还可大大缩短育种年限。自1982年至今,
6、甘蓝型油菜小孢子培养获得胚状体后,国内外利用游离小孢子培养技术在芸薹属作物上相继取得成功,1991年Takahata等首次利用青花菜进行了小孢子培养,随后张德双等、王春丽等也在青花菜游离小孢子培养上取得了成功。虽然小孢子培养技术日趋成熟,但很多学者侧重于对小孢子胚胎发育的诱导因素进行研究,本试验以5个不同基因型的青花菜为材料,对游离小孢子培养与植株再生进行了研究,旨在完善青花菜小孢子培养技术,同时也可为青花菜的遗传育种提供新的材料。1材料和方法1.1材料供试材料由天津科润蔬菜研究所提供,供试材料于2012年10月定植于天
7、津市科润蔬菜所,采取常规栽培管理,翌年3—4月植株出现花蕾后,选取主花序上的花蕾进行小孢子培养。1.2小孢子培养方法参考张德双等的研究,取处于单核晚期和双核早期的花蕾(4.1~5.0mm)的小孢子进行培养。小孢子的分离、纯化培养参考赵前程等的方法,用50g·L-1质量浓度的次氯酸钠溶液进行表面消毒,经无菌水冲洗,用含蔗糖为100g·L-1的B5培养基进行游离、洗涤,用含蔗糖为130g·L-1,pH值5.8,添加6-BA(1mg·L-1)和NAA(0.1mg·L-1)的NLN液体培养基进行小孢子培养,并添加一定的活性炭,培
8、养密度为1×105~2×105个·mL-1,热激后,置25℃培养箱中继续暗培养,利用倒置显微镜观察小孢子发育进展。1.3胚胎发生与胚培养小孢子受到热激后开始细胞分裂,黑暗培养2周左右,肉眼可见胚状体。30d左右,胚状体处于子叶期,转移至添加6-BA(0.2mg·L-1)和NAA(0.02mg·L-1)的MS培养基上,
