大白菜游离小孢子培养及其胚胎发生和加倍机理的研究

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1、中国农业科学院硕士学位论文大白菜游离小孢子培养及其胚胎发生和加倍机理的研究姓名：李菲申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：孙日飞20060501缩略词表DAPI：4，6～danidino～2～phenylindoledihydrochloride一盐酸一4，6～脒基一2一苯基吲哚B5．13培养基：蔗糖浓度为13％的B5培养基B5．0培养基：无蔗糖的B5培养基B5固体再生培养基：蔗糖浓度为2．5％，琼脂浓度1．O％的B5培养基NLN．13培养基：蔗糖浓度为13％的NLN培养基单核靠边期小孢子：从四分体释放出来的小孢子随体积增大，小孢子细胞质发生液泡化，逐渐形成一个中央大液泡，细胞核随着从中

2、央移到细胞的一侧，此时的小孢子称为单核靠边期小孢子。胚胎发育A途径：小孢子诱导脱分化启动后，小孢子核由正常的有丝分裂形成一个大的营养细胞和一个小的生殖细胞。以后营养细胞继续分裂，产生个单倍体的球型胚状体，胚状体最终由于花粉外壁的破裂而被释放出来。胚胎发育B途径：小孢子诱导脱分化启动后有丝分裂形成两个均等的细胞而不分化为营养细胞和生殖细胞，这两个均等细胞再继续分裂，最终形成胚状体。VIl独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及耿得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它

3、教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名苍拜时间：≯-戽，月7几关于论文使用授权的声明本人完全了觯中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农qk科学院有权保留送交论文的复印件乖I磁盘，允许论文被查阅和借渊．可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位l睡文。同意中国农qk科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论立的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)论文作者签名导师签名黼时间：砷。1f年‘月7日时间：彬年矗月多日第一章芸薹属植物游离小孢子培养研究进展芸蔓属植物种质

4、资源十分丰富，在我国栽培的芸薹属植物中一部分是重要的叶菜娄蔬菜，一部分是油料作物．二者在国民经济中都占有重要的地位。我国在芸薹属植物常规育种方面成绩显著，但随着育种目标的小断推进，仅仅依靠常规育种手段已经不能满足育种工作的需要。单倍体育种技术为缩短育种年限、提高育种效率提供了可能。游离小孢子培养是获得单倍体的丰要途释之‘，随着小孢，培养方法的日趋完善，这一技术开始被厂泛鹰用于常规杂交育种，逐渐成为作物改良和新品种培育工作的一个重要手段。游离小孢子培养是在花药培养基础上发展起来的单倍体诱导技术，由于小孢子为单细胞，具有天然的分散性，数量巨大，易于获得，。茁克服了花药培养的诸多缺陷，同时它是种

5、在单细胞水平上获得纯系的培养方法，能直接利用高等植物的未成熟花粉即小孢子离体培养成单倍体植株，再经过人上或自然加倍而成为纯合的二倍体植株。在植物育种、基因工程以及生理研究等方面显示山』’阔的应用前景，从而受到研究人员的J1泛亲睐。1．1发展进程1972年sharp等用看护培养法培养番茄的离体花粉，获得了单倍体无件繁殖系；之后Ni哑h等(1973)首次成功麻用游离小孢子培养技术获得了毛叶曼陀罗的小孢子胚与再生植株；二十世纪80年代，Kyo和Harada(1985；1986)在烟草上成功建立了有效的游离小孢子培养体系，并对小孢子的离体萌发和离体胚胎发生的调控进行了研究。1982年．Lichte

6、r首次报道了甘蓝型油菜小孢子培养成功获得了小孢子腓及其再生植株，使十字花科芸薹属作物游离小孢子培养技术进入快速发展阶段。在此后的二1年间，游离小孢子培养技术先后在芸疆属作物的结球目蓝、大白菜、花椰菜、小白菜、黑芥、叶芥、青花菜等f余种蔬菜中获得成功，并在材料基因犁、培养基、培养方法和培养条件、胚状体的植株再生和加倍等方面的研究取得了一定进展(Miyasaka，1989；Ljcher，1989：张凤兰等，1994；干蒂等．1996)，使游离小孢子培养技术体系得到不断地完善。表卜1芸I属作物游离小孢子培养获得再生檀株一览表TabIe1．1ExhibltJ∞Dftheplantsfr硼{soIa

7、tedmicrosDor⋯ltureinBrassica1．2研究现状1．2．1供体檀株对小孢子胚胎发生的影响1．2．1．1基冈型对胚胎诱导的影响在芸葵属植物游离小孢子培养中，供体植株的基因型是影响小孢子胚胎发生的关键因素。返主要体现在两个方而。一方面，不同基闻型决定供体植株是否能够诱导出胚，另一方面体现在不同基因型诱导出胚的产胚率的差异。余风群等(1嘶)用130份H蓝型油菜进行小孢子培养，有35份获得胚状体；张德双等(