甘蓝型油菜游离单细胞培养及植株再生

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1、遗传HEREDITAS(Bering)13(3):8-111991甘蓝型油菜游离单细胞培养及植株再生罗科1)罗鹏（四川大学生物系，成都,610064)本文首次报道了甘蓝型油菜(Brassicanapes）二倍体游离单细胞的培养并再生出了植株。从甘蓝型油菜下胚轴愈伤组织分离的游离单细胞在含有2mg/L2产-D和31ng/LBA的Nitach培养基中作浅层液体静置培养时，可形成大量愈伤组织。在附加3mg/LB人和2-6mgZLGA，的MS培养基上，从这些愈伤组织中可高频率地诱导产生再生植株。从3个供试品种（Canadiantwin,Altex和81008)的游离细

2、胞培养中，都获得了再生植株。其中Canadiantwin的再生频率高述67cfo,Altex和81008的再生频率分别为41％和11.7%0关镇词：细胞培养，植株再生，甘蓝型油菜植物细胞培养是一项重要的植物遗传操作技术。有关油菜的组织及原生质体培养已有许材料和方法多报道，但对油菜的细胞培养国内外有关的报（一）供试材料道却很少。Singh等IQ以白菜型油菜（Brassica本文所使用的材料是甘蓝型油菜的三个栽campestris）为材料进行悬浮细胞的培养，获得培品种：Canadiantwin,Altex和81008。材了再生植株。宋玉华等切进行芥菜型油菜(B.料

3、的种子用0.1外HgCl,表面灭菌20分钟，无jtsncea）的游离单细胞培养获得成功，建立了菌水冲洗几次后，接种到附加2多蔗糖和1000易再生植株的体细胞无性系。在甘蓝型油菜mg八水解酪蛋白的。.6多琼脂上，在光照下进(B.napes）方面，SacristanE91用单倍体细胞行培养。悬浮培养物进行油菜黑胫病(Phomalingam)（二）实验方法毒素的抗性筛选，获得了抗性植株。Orr等［I4)报1．下胚轴切段愈伤组织的诱导待无菌道了用游离小抱子来源的单倍体细胞悬浮培养苗长至5厘米左右时，将下胚轴切成。.5厘米物进行冷冻处理，处理后的存活细胞仍保持体长的小段

4、，接种于Nitach固体培养基上，在黑细胞胚胎发生的能力。但是，迄今未见甘蓝型暗中诱导愈伤组织。培养基附加0.2mg/L2,4-油菜二倍体细胞培养再生植株的报道。由于二D,3mg/LBA,200mg/L水解酪蛋白，30多蔗倍体细胞在离体培养中的遗传稳定性比单倍体糖和0.5多琼脂，两周后继代一次。细胞高，显性突变能在二倍休细胞当代表现出2.细胞液体振荡培养经过约一个月的来，并且一旦从二倍体细胞获得了显性的再生愈伤组织诱导培养后，将愈伤组织转入液体培突变植株，不用加倍便可直接加以利用，因此用养基，在摇床上振荡培养（120转／分）。液体培二倍体细胞进行显性突变体的选

5、择在一定程度LuoKeetal.:PlautRegenerationfromSingle上优于单倍体细胞翎。本文用甘蓝型油菜下胚CellCultureofBrassicanapus轴愈伤组织为材料分离游离单细胞，经培养再1)现工作单位：中国科学院成都生物研究所，成都610015"生出了植株，现将结果报道如下。本文于1990年‘月1114收到．养基与固体培养基基本相同，只是除去凉脂并260C，愈伤组织的生长明显减缓，质地也变得将2,4-D的浓度提高到2mg/Lo紧密。3．游离单细胞的培养液体振荡培养约愈伤组织的质地对后来的细胞分离有很大一周后，将细胞悬浮培养物用

6、200目铜丝网过的影响。据观察，除温度外，愈伤组织的质地还滤。滤出液离心（500转／分）1分钟，使细胞沉取决于培养基中2,4-D的浓度。当2,4-D的淀。弃上清液后用新鲜培养基洗涤2次，再加浓度较低时，愈伤组织质地比较疏松，容易分离人培养基使细胞重新悬浮，并调节细胞密度至出单细胞；而当2,4-D浓度增高，愈伤组织的1.5X105/m1。取lml细胞悬浮液置于直径为质地也变得紧密，很难分离出细胞。此外，在6厘米的培养皿中，在黑暗中进行浅层液体静Nitsch,MS和B，三种基本培养基上，Nitsch诱置培养。导的愈伤组织质地比较疏松，而MS和BS诱导4．植株再生当

7、愈伤组织长至0.5-1的愈伤组织则质地紧密。mm时，转移到分化培养基上进行分化培养。（二）游离细胞的分离与培养分化培养基为ms，附加3mg/LBA,4-6mg/L我们在3个供试品种中都获得了较满意的GA,和3多蔗糖。游离细胞。愈伤组织在继代培养后，应及时转入液体振荡培养，一般不要超过2周。这样分结果与讨论离出的细胞有较高的活力，易于再生愈伤组织，（一）愈伤组织的诱导否则分离出的细胞大多不能分裂。下胚轴切段接种后约一周，便在切口处产图1所示是振荡培养过程中的细胞生长曲生愈伤组织。3个品种都能高频率地产生愈伤线。从图1中可见，细m在振荡培养前6天里组织。但8100

8、8的愈伤组织生长较快，色白，质生长较快