黑曲霉α葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究

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1、广西大学硕士学位论文黑曲霉α-葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究姓名：刘玉燕申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：梁智群2003.5.1彦庙大-竽硕士学位论文黑曲霉Ⅱ一葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究摘要本实验室筛选到的一株黑曲霉(Aspergi，，坩niger)M-1，能产生活性较强的Ⅱ一葡萄糖转苷酶。本研究以黑曲霉M-1为出发菌株，对其Q一葡萄糖转苷酶的产酶影响因素、纯化、酶学性质以及必需基团进行系统的研究，结果如下：通过对影响黑曲霉M一1产Q一葡萄糖转苷酶的单因素分析，得液态发酵生产d一葡萄糖转苷酶的最适

2、产酶条件为：4％A，2％B和1％G；在33℃，起始pH值为6．5，转速为140r／min，接种量为6％，装液量100mL条件下，发酵4．Od，酶活力达296．05U／mL，添加O．1mmoI／L的酶作用底物甲基一Q-D-葡萄糖苷对产酶的诱导作用最大。通过硫酸铵分级分离，DEAE—Ce

3、lulose52、DEAE-sepharoseCL一6B和SephadexG-100柱层析，SDS—PAGE等，从黑曲霉M-1酶提取液中分离纯化得到d一葡萄糖转苷酶，分子量约为11OkDa。通过以甲基一Ⅱ-D-葡萄糖苷为底物，对该酶的部分性质进行了

4、研究。，／结果表明：pH值为6．o时最稳定：Km值为4．32mmol／L；温度在小于60＼℃稳定：ca”、M92+对酶有激活作用，而cu”、Ag+、Fe2+则表现为抑制作、用。该Q一葡萄糖转苷酶的N-末端氨基酸序列为N-SVPGTEYVV一94一／在一定条件下分别以对氯汞苯甲酸(pCMB)、巯基乙醇(ME)、乙基癀商盂簿硕士学位论文替一(3一二甲氨慕丙基)碳二暇胺盐黻盐(EDC)、一氯艺酸(ClAc)、乙酰商酮、N一溴代琥珀酰征胺(NBS)簿亿学修饰剂对Q一葡萄糖转苷酶的／A器錾氨基鼗残基送行选择修馋，葬测定其酶活力变纯，f续票

5、表翳：pCMB、＼ME、EDO、0IAc陡显著抑制酶的活性，活力的下降与修饰剂的浓度有关，乙酰丙酮、NBS的修饰对酶的抑制作用不明照。因此，认为Cys、Asp(GJu)和His残基为d一葡萄糖转苷酶的必需基团，部分童硫键对保护黼的催化K珐艇是必需的。善一一关键词：黑曲霉ja一葡萄糖转苷酶，发酵条件?纯仪性欲化学修饰痘商大警硕士学位论文FERMENTATIoNCoNDITIoNS．PURIFICATIoNANDCHARACTERIZATIONOFq—TRANSGLUCoSIDASEFROMABSTRACTA．nigerM-1whi

6、chwasscreenedinourlaboratoryproducedastrongly。【-transglucosidase．Inthispaper,studiesonthefermentationconditions，purificationandcharacterizationof0【一transglucosidaseanditsnecessarygroupswascarriedoutinthisdissertation．Themainreportswereasfollowing：Thefermentationcondi

7、tionsinshakingflaskswereinvestigatedbythemethodofsingle-factoranalysis，thesuitablemainmediumwasachieved：whichcontained4％A，2％Band1％G；theA．九喀盯M-1wasinoculatedintolOOmLmediuminflask，shakingin33"Cat140r／minforfourdays，withinitialpH6．5and6％inoculavolume：addingO．1mmol／Lmet

8、hyl0【-D—glucopyranosidehadinductiveeffectonenzymeformation，the旺一transglucosidaseactivityamountedto296．05u／mlByammoniumsulphatefractionalprecipitation，DEAE—cellulose52、DEAE-sepharoseCL-6Banionexchangechromatography、sephadexG一100gelfiltrationandSAS-PAGE，a0【一transglucos

9、idasewaspurifiedfromextractcontentofA．nigerM-1，themolecularweightoftheenzymewasabout3唐商大譬硕士学位论文110∞a．Somepropertiesoftheenzymewereu