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时间:2019-05-13
《黑曲霉α葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、广西大学硕士学位论文黑曲霉α-葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究姓名:刘玉燕申请学位级别:硕士专业:微生物学指导教师:梁智群2003.5.1彦庙大-竽硕士学位论文黑曲霉Ⅱ一葡萄糖转苷酶的产酶条件、纯化及其性质研究摘要本实验室筛选到的一株黑曲霉(Aspergi,,坩niger)M-1,能产生活性较强的Ⅱ一葡萄糖转苷酶。本研究以黑曲霉M-1为出发菌株,对其Q一葡萄糖转苷酶的产酶影响因素、纯化、酶学性质以及必需基团进行系统的研究,结果如下:通过对影响黑曲霉M一1产Q一葡萄糖转苷酶的单因素分析,得液态发酵生产d一葡萄糖转苷酶的最适
2、产酶条件为:4%A,2%B和1%G;在33℃,起始pH值为6.5,转速为140r/min,接种量为6%,装液量100mL条件下,发酵4.Od,酶活力达296.05U/mL,添加O.1mmoI/L的酶作用底物甲基一Q-D-葡萄糖苷对产酶的诱导作用最大。通过硫酸铵分级分离,DEAE—Ce
3、lulose52、DEAE-sepharoseCL一6B和SephadexG-100柱层析,SDS—PAGE等,从黑曲霉M-1酶提取液中分离纯化得到d一葡萄糖转苷酶,分子量约为11OkDa。通过以甲基一Ⅱ-D-葡萄糖苷为底物,对该酶的部分性质进行了
4、研究。,/结果表明:pH值为6.o时最稳定:Km值为4.32mmol/L;温度在小于60\℃稳定:ca”、M92+对酶有激活作用,而cu”、Ag+、Fe2+则表现为抑制作、用。该Q一葡萄糖转苷酶的N-末端氨基酸序列为N-SVPGTEYVV一94一/在一定条件下分别以对氯汞苯甲酸(pCMB)、巯基乙醇(ME)、乙基癀商盂簿硕士学位论文替一(3一二甲氨慕丙基)碳二暇胺盐黻盐(EDC)、一氯艺酸(ClAc)、乙酰商酮、N一溴代琥珀酰征胺(NBS)簿亿学修饰剂对Q一葡萄糖转苷酶的/A器錾氨基鼗残基送行选择修馋,葬测定其酶活力变纯,f续票
5、表翳:pCMB、\ME、EDO、0IAc陡显著抑制酶的活性,活力的下降与修饰剂的浓度有关,乙酰丙酮、NBS的修饰对酶的抑制作用不明照。因此,认为Cys、Asp(GJu)和His残基为d一葡萄糖转苷酶的必需基团,部分童硫键对保护黼的催化K珐艇是必需的。善一一关键词:黑曲霉ja一葡萄糖转苷酶,发酵条件?纯仪性欲化学修饰痘商大警硕士学位论文FERMENTATIoNCoNDITIoNS.PURIFICATIoNANDCHARACTERIZATIONOFq—TRANSGLUCoSIDASEFROMABSTRACTA.nigerM-1whi
6、chwasscreenedinourlaboratoryproducedastrongly。【-transglucosidase.Inthispaper,studiesonthefermentationconditions,purificationandcharacterizationof0【一transglucosidaseanditsnecessarygroupswascarriedoutinthisdissertation.Themainreportswereasfollowing:Thefermentationcondi
7、tionsinshakingflaskswereinvestigatedbythemethodofsingle-factoranalysis,thesuitablemainmediumwasachieved:whichcontained4%A,2%Band1%G;theA.九喀盯M-1wasinoculatedintolOOmLmediuminflask,shakingin33"Cat140r/minforfourdays,withinitialpH6.5and6%inoculavolume:addingO.1mmol/Lmet
8、hyl0【-D—glucopyranosidehadinductiveeffectonenzymeformation,the旺一transglucosidaseactivityamountedto296.05u/mlByammoniumsulphatefractionalprecipitation,DEAE—cellulose52、DEAE-sepharoseCL-6Banionexchangechromatography、sephadexG一100gelfiltrationandSAS-PAGE,a0【一transglucos
9、idasewaspurifiedfromextractcontentofA.nigerM-1,themolecularweightoftheenzymewasabout3唐商大譬硕士学位论文110∞a.Somepropertiesoftheenzymewereu
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