黑曲霉c112产β-葡萄糖苷酶的条件优化及酶学性质研究

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1、硕士学位论文黑曲霉Cl12产B一葡萄糖苷酶的条件优化及酶学性质研究3．1．2试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．473．1．3培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。483．1．4实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．483．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．483．2．1摇瓶产酶试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．483．2．2测定方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．483．2．3发酵过程中的pH调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯493

2、．2．4发酵过程中的温度的分阶段调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一493．3结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．493．3．1发酵过程中的pH调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯493．3．2发酵过程中的温度的分阶段调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．513．4小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55第四章p一葡萄糖苷酶的部分特性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一574．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．574．1．1实验用酶及试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．57

3、4．1．2实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一574．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．574．2．1B-葡萄糖苷酶分解pNPG的动力学实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．574．2．2不同温度对p．葡萄糖苷酶活力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．584．2．3不同温度对p．葡萄糖苷酶反应速率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．584．2．4p．葡萄糖苷酶的热稳定性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．584．3结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．594．3．1D-葡萄糖苷酶分解pNPG的动力学参数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

4、594．3．2p．葡萄糖苷酶的热稳定性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．604．3．3不同温度对D．葡萄糖苷酶反应速率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．604．3．460℃下的酶耐受性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6l4．4小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61第五章结论和创新⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯635．1结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．635．2创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯645．3讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．64硕士学位论文黑曲霉Cl12产B一葡萄糖苷酶的条件优化及酶学性质研究参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67附录A缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一73附录B攻读硕士学位期间的主要学术成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯76硕士学位论文黑曲霉Cl12产13一葡萄糖苷酶的条件优化及酶学性质研究第一章绪论石油是不可再生资源。全球石油剩余约5871亿吨，据估计仅可供使用92年；而天然气和煤炭分别可供使用63年和90年【

6、l】。且我国石油资源相对贫乏。研究表明，我国的石油生产能力仅占消费总量的40％t21。在此大背景下，全球石油价格屡创新高，曾一度突破140美元一桶【¨。严峻的国际能源形势，对我国经济的持续健康发展带来巨大压力，威胁我国的能源安全。由此可见，发展可再生且相对清洁的生物能源已迫在眉睫。生物能源，即通过对有机生物质进行加工转换而生产出的电力、气体或液体燃料等二次能源。它既是可再生能源，又是无污染或低污染的绿色能源。燃料乙醇是当前世界上生产规模最大的生物能源。我国的燃料乙醇生产已形成规模，但其中大多是以玉米为原料的第一代燃料乙醇，目前产量居世界第一--131。由于第

7、一代燃料乙醇，即粮食乙醇在发展过程中与人争粮，引发了一系列的粮食安全及环境保护问题，使“十一五”期间的燃料乙醇发展路径转变成为：在不占地、不消耗粮食、不破坏生态环境的原则下，坚持发展非粮乙醇[41。发展非粮乙醇的优越性在于，生产非粮乙醇的原料纤维素等物质十分丰富，廉价，易取得。我国每年生产粮食5亿吨，产生的秸秆和农业加工副产品高达7．8亿多吨，折合标准煤3．883亿吨。其中玉米秸秆33182万吨，约占总量的42．4％t51。于此同时，我国拥有大量的不宜种植粮食作物的边际性土地。以这些土地20％的利用率计算，每年产生的生物质都能达到约10亿吨[21。发展非粮乙

8、醇，不但可以一定程度上缓解我国的能源压力，亦能够使普