黑曲霉诱变育种产β-葡萄糖苷酶研究.pdf

《黑曲霉诱变育种产β-葡萄糖苷酶研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、13-glucosidaseStudyfromMutationandSelectionofAspergillusnigerbySHICairuiAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofScienceBiochemistry&MolecularBiologyCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictCh

2、angshaHunan410004，P．R．CHINASupervisorProfessorWANGYiqiangandCHENJienanApril．2011．It中南林业科技大学学位论文原创性声明llltlllllllll11111111lY1913541本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体

3、，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：石绛乡庄、Zo『J年‘月-7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密《(请您在以上相应方框打“√”)作者签名：2口f／年石彩蕊，石月7

4、日导师签名：立≥j§弘I1年6月7日摘要p一葡萄糖苷酶(EC3．2．1．21，p．glucosidase)，能水解纤维二糖和短链的纤维寡糖生成葡萄糖，其广泛存在于动植物和微生物体内。近年来，p．葡萄糖苷酶在纤维素降解、食品和医药等多方面得到了广泛的应用，产酶优良菌株的选育、产酶培养基条件的优化是研究的重点。本研究通过紫外线诱变黑曲霉凹spergillusniger)30786，筛选p．葡萄糖苷酶高活性突变菌株及对优良突变菌株产酶培养基条件进行优化，获得主要结果如下：(1)黑曲霉(Aspergillusniger)30786原始菌

5、株产酶培养基条件优化。首先通过单因素试验研究碳源、氮源、培养基初始pH等条件对B．葡萄糖苷酶酶活的影响，在此基础上，利用响应面试验设计对黑曲霉产D．葡萄糖苷酶的条件进行优化。结果表明玉米芯、硫酸铵、初始pH值对黑曲霉产D．葡萄糖苷酶酶活都有影响，黑曲霉液体发酵生产B．葡萄糖苷酶最佳条件为：玉米芯21．59／L，硫酸铵6．49／L，初始pH值5．2；p．葡萄糖苷酶酶活的最大响应值为5．34U／ml。(2)产D．葡萄糖苷酶突变株CIl2的选育。以黑曲霉口spergillusniger)30786为出发菌株，通过紫外诱变方法对该菌株进

6、行改良，经筛选获得一株突变株C1l2，其酶活稳定。(3)突变株C112产酶培养基条件优化。对筛选得到的黑曲霉突变株C112产p．葡萄糖苷酶液体发酵培养基进行优化。利用Plackett．Burman设计对影响p．葡萄糖苷酶液体发酵的8个因素进行全面考察。结果表明玉米芯、硫酸铵和磷酸二氢钾是影响B．葡萄糖苷酶酶活的主要因子，3者在大于95％的概率水平上差异显著。用最陡爬坡法逼近影响因素的最佳值区域。然后利用中心复合设计，以获得最佳培养基，采用CCD设计，经过响应面分析建立模型，软件预测得玉米芯，硫酸铵，磷酸二氢钾分别为30．79／L

7、，79／L，69／L，此时得到的最大产酶量为7．22U／ml。(4)突变株遗传变异分析。对原始菌株黑曲霉(Aspergillusniger)30786，突变株C112、C206、C12和C89这5株菌株的基因组DNA进行RAPD分析，用20种随机引物。分析结果显示，黑曲霉30786与突变株Cl12，C206，C12和C89之间的遗传相似系数在0．87．0．89之间，说明它们之间有一定的变异。关键词：黑曲霉；p．葡萄糖苷酶；诱变；响应面法；培养基优化；随机扩增多态性DNAABSTRACTp—glucosidasisanenzyme

8、whichcanhydrolyzecello-oligosaccharideandcellobiosetoglucose．Itiswidelyexistentinvariouslivingthings．Itplaysanimportantroleinthehyd