1223-β-葡萄糖苷酶高产菌株筛选诱变及其发酵的研究

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1、B■葡萄糖昔酶高产菌株筛选、诱变及其发酵的研究潘艳,张益波,郭志敏,王诗雨,邢慧萌,林风,滕利荣,侯阿澧*(吉林大学生命科学学院,长春130012)摘要:本研究从常年堆积玉米秸秆的腐土中分离得到一株能生产卩•衙萄糖昔酶的菌株zyb5,此菌株具有较强的生长繁殖能力和产酶能力。对zyb5进行紫外和化学诱变,得到菌株UV-4-DES5o在30°C,150rpm摇床发酵4天后,产酶活力由出发菌株的0.821U/mL上升到2.352U/mL,提高了2.8倍。由于产酶活力较高,使用合适的工农业废料作为发酵培养基时,酶活力增加

2、了0.386U/mL,UV-4-DES5菌株具有很强的工业化应用价值。关键词:腐土;卜葡萄糖苜酶;UV诱变;DES诱变;工农业废料。中图分类号:Q814文献标识码:B文章编号:Studyonscreeningandmutationof卩・glucosidase-producingstrainPANYan,ZHANGYi-bo,GUOZhi-ming,WANGShi-yu,XINGHui-mcng,LINFeng,TENGLi-rong,HOUA-li(Collegeoflifescience,JilinUnive

3、rsity,JilinChangchun130012China)Abstract:Inthisstudy,astrainzyb5whichcanproduceefficientP-glucosidaseandgrowthrapidwasisolatedfi-omdecayedsoil・ThenthestrainwastreatedbyUVandDES,bywhichamutantnamedUV-6-DES5wasisolated.Thep-glucosidaseactivitywasincreasedfrom0.

4、821U/mLto2.352U/mL(about2.8folds).P-Glucosidascactivityincrease0.386U/mLwithvariousagro-industrialresidueswerescreenedascarbonandnitrogensources・TheresultssuggestthatUV-6・DES5maybeacandidateforindustrialprocessof卩-glucosidaseproduction.Keywords:Decayedsoil;卩・

5、Glucosidase;UV;DES;Agro-industrialresidues;卩■葡萄糖苜酶(EC321.21;p-D-Glucosidase)也叫纤维二糖酶,在不同生物中由多种同源酶组成,作用是从非还原性末端催化水解卩■葡萄糖营键释放卩・D■葡萄糖。卩■葡萄糖昔酶在不同的生物体内和生物技术应用中都有重要的作用,这包括对生物质的降解⑴;利用纤维秸秆类生产乙醇[典作为一种重要风味酚,它能作用于茶叶、葡萄酒以及果汁中的风味前体物质,释放出风味成分,起到增香作用〔叫也是合成重要的糖配体⑹等。在纤维素酶的糖化过程

6、中,纤维二糖对内切纤维素酶和外切纤维素酶冇很强的抑制作用,添加过量“葡萄糖昔酶可以减缓这种竞争性抑制作用。基金项目:吉林大学研究生创新基金(20101043)和吉林省农业重大专项(20096013)资助项目。作者简介:潘艳(1979-),女,在读博士研究生,研究方向为微生物与生化药学;通讯作者:侯阿潰(1977・),男(汉),讲师,主要从事生物技术制药研究。本文从玉米秸秆天然腐烂的腐土中筛选得到了一柱能生产高效胞外卩■葡萄糖营酶的菌株。对此菌株进行紫外、化学、以及化学和紫外的复合诱变叫得到的UV-6-DES5具有

7、生长速度快,利用工农业废料产酶高的特性,可能是解决卩■葡萄糖昔酶工业化发酵生产的优良菌株。1材料和方法1.1材料1」」试剂所有用到的化学药品均购买于上海生工生物工程公司,秸秆的腐土采集于常年堆积的秸秆堆下方。1.1.2工农业废料工农业废渣即麦隸(WB)、气爆玉米秸秆(TCS)、未处理的玉米秸秆(UTCS)、酒糟(DDG)、玉米浆(CSL)、豆粉(SM)或豆饼粉(BCP)都在当地获得,将这些原料烘干并进一步粉碎,过0.355mm(45目)筛备用。1.1.3仪器设备电热恒温培养箱SKP-01(湖北省黄石市医疗器械厂,

8、屮国湖北),超净工作台VS-1300-U(苏净集团安泰公司,中国),紫外可见分光光度计752(上海光谱仪器有限公司,中国上海),SKPC-01电热恒温鼓风干燥箱(湖北省黄石市医疗器械厂),MDF-492超低温电冰箱(日本三洋公司),可调式微量取液器(徳国Eppcndorf公司)等。1.1.4培养基纤维二糖诱导培养基:每升屮含有酵母2.5g;纤维二糖2.5g;蛋白腺2.5g

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