共轭亚油酸高产菌株的诱变选育及其在发酵乳上的应用研究

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1、Secrecy：一NO．ChineseAcademyofAgriculturalSciencesMasterDissertationMutationBreedingofL．plantarumwithHighYieldofConjugatedLinoleicAcidandItsApplicationinYogurtMs．Candidate：HongweiZhaoAdvisor：Prof．ShurongLiMajor：FoodScienceSpecialt：FoodMicrobiology&FermentationEngineeringInstituteofAgro—foodScien

2、ceandTechnologyChineseAcademyofAgriculturalSciencesJune2011中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目共轭亚油酸高产菌株的诱变选育及其在发酵乳上的应用研究食品微生物论文作者赵宏伟专业食品科学研究方向与发酵工程指导教师李淑荣培养单位(研究所)农产品加工所硕(博)姓名职称单位专业签名导师评硕导口中国计量科学研究院电离辐射食品科学＼＼张彦立研究员博导■与医学工程计量科学研究所阅硕导口农产品质量I＼＼人吕加平研究员中国农业科学院农产品加工所博导一与作物安全答糖k辩硕导口中国农业科学院农产品加生物化学与主戴小枫研究员席

3、博导■工研究所分子生物学硕导口中国农业大学食品科学与农产品加工．做幽廖小军教授博导■营养工程学院与贮藏工程硕导口中国农业机械化研究院农食品科学毳玩驭’，赵有斌研究员博导一产品加工中心答硕导●中国农业大学食品科学与农产品加工掰％戴瑞彤副教授博导口营养工程学院与贮藏工程辩豸瞄l吼张春晖教授级硕导■中国农业科学院农产品加农产品加工高工博导口工研究所与贮藏工程委硕导口U员博导口硕导口博导口硕导口博导口会议记录(秘书)孙佳星中国农业科学院农产品加工研究所航天育种楼203会议室论文答辩时间地点2011年6月17日08"30独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的

4、研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我～同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：咯癖时问：洲，年f月二／日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时f．-J：乙

5、纠／年‘月2．1日时间：加I，年g月纠日昂歹锄弓咯№吆抽签名生签究师开导摘要共轭亚油酸(ConjugatedLinoleicAcid，简写CLA)是一种含有18个碳原子的不饱和脂肪酸，研究发现它具有多种生理活性，例如抗癌、减肥、增强免疫力等。它是人体必需脂肪酸一亚油酸(LinoleicAcid，简写LA)的共轭形式，目前工业上主要由化学法合成。虽然转化率很高，但是产物组成复杂，还含有很多反式脂肪酸，限制了其在食品行业的应用；除此，在化学合成过程中涉及高温高压操作，耗能高、污染大、危险系数大，增加了企业的投资成本。研究发现，由微生物转化LA生产CLA具有诸多优点，无污染，反应条件温和

6、，不涉及强酸强碱，对设备要求低，合成产物异构体较单一，利于分离纯化等，逐步被广大科研工作者重视。本文主要从实验室保藏的一株有CLA合成能力的植物乳杆菌入手，对其进行诱变处理，以期提高该菌株的发酵能力，获得高产菌株；研究了影响该菌株发酵能力的因素，并利用响应面分析法优化了发酵工艺：利用该菌株的活细胞作为细胞酶，探索了在超临界状态下CLA的转化试验；最后将该高产菌株应用在富含CLA发酵牛乳的研制上，研究获得了最佳的发酵条件。主要结论如下：l、利用圹注入、亚硝基胍复合诱变法，对原始菌株进行诱变处理，获得了一株高产CLA的突变菌株，命名为L．plantarumM-66。较出发菌株的发酵能力

7、，L．plantarumM．66合成CLA的产量提高了47％，达到1971tg／mL。2、在单因素试验的基础上，运用中心组合试验设计原理采用5因素3水平响应面分析方法对影响突变株厶plantarumM-66发酵能力的因素进行了优化，结果为：反应时间30h，反应温度34℃，pH值7．0，接种量3％，底物浓度1．2mg／mL，在此条件下进行验证试验，试验结果CLA平均产量为224．1I_tg／mL，转化率为l8．68％。3、对超临界C02状态下利用L．plantarumM